华 南 师 范 大 学 实 验 报 告
学生姓名_______ 林 鸿 锦__ _ _ 学___ 号 _ _ 20070004002 _____
专___ 业___ _ 综合理科二班 ___ 年级、班级_______ 07级 ____ ___
课程名称____ _ 生物化学 _______ 实验项目 醋酸薄膜电泳分离血清蛋白
实验类型__ □验证 □设计 □综合_ 试验时间 2008 _ 年_ 9_ 月_ 8 日
实验指导老师 ___ _ 陈 文 利 _ __ 实验评分 ___________________ ____
一、目的
1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作
2、学会用醋酸纤维薄膜电泳分离血清中各种蛋白质组分
二、原理
在外电场的作用下，带电颗粒，例如不处于等电状态的蛋白质分子，在电场中将向着与其所带电荷电性相反的电极泳动这种现象称为电泳。醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它具有均一泡沫样的结构，厚度仅120微米，有强渗透性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白质电泳有简便、快速，样品用量少，应用范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋白质，脂蛋白，血红蛋白，糖蛋白和同功酶的分离及用于免疫电泳中。
蛋白质是两性电解质，在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。本实验把血清放在pH8.6缓冲溶液湿透的醋酸纤维膜上进行电泳，血清蛋白在pH环境中以不同速度向正极移动。结果，血清蛋白在膜条上分为前后几条平行带，从负极端起，依次为γ球蛋白、 β球蛋白、α2球蛋白、 α1球蛋白和清蛋白。
三、材料、试剂与器具
（一）材料
1、新鲜血清一无溶血现象（稀释5倍）。
2、醋酸纤维素薄膜——2×8厘米(浙江黄岩曙光化工厂产品)。
（二）试剂
1、巴比妥一巴比妥钠缓冲液（0.07M，pH8.6）：称取巴比妥1.66克和巴比妥钠12.76克，溶于少量蒸馏水后定溶到1000毫升。
2、染色液：称取氨基黑10B_ 0.5克，加入蒸馏水40毫升，甲醇50毫升和冰醋酸10毫升，混匀，放于具塞的试剂瓶保存（可重复使用）。
3、漂洗液：取95%乙醇45毫升，冰醋5毫升和蒸馏水50毫升，混匀，在具塞的试剂内保存。
（三）器具
1、培养皿（直径9—10厘米）
2、直尺、铅笔、竹镊、2/3的盖玻片
3、电泳仪和电泳槽
4、普通滤纸
5、染色缸
四、操作步骤
（一）仪器和薄膜的准备
1、醋酸纤维薄膜的选择：实验中应选择质地均匀的薄膜，因为薄膜的质量对电泳的结果影响很大。例如薄膜不均匀可以造成区带歪扭不齐，各区带界线不清，背景脱色困难，实验结果难于重复等现象。选用薄膜时，若迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，表明薄膜质地均匀；若润湿时，薄膜上出现深浅不一致的条纹或斑点等，为不均匀的薄膜。
将选用的薄膜用镊子轻压，使它全部浸入缓冲液内，待膜完全浸透（约半小时）后用镊子夹住薄膜的边角,小心取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时分辩出光泽面和无光泽面，并在角上用铅笔标上记号。(注意:不要用手直接接触薄膜,带手套)
2、制作“滤纸桥”（实验室已准备）
（二）点样
在薄膜无光泽的一面点样，点样区距负极端1.5厘米处。点样时，用2/3宽的盖坡片的轻轻的沾一层血清印在点样区，使形成具有一定宽度，粗细匀称的直线。