实验三 酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察
一 目的要求
1.观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2.掌握酵母菌的菌落特征及其与细菌菌落的区别。
3．学会识别霉菌的菌落特征，掌握霉菌的乳酸石炭酸制片法。
4．学习观察霉菌个体形态及各种无性孢子的方法。
5．学会观察放线菌的菌落特征，个体形态及其繁殖方式。
二 实验原理
1．酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，多数是圆形或椭圆形，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
2.霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。因此，在观察时要注意菌 丝直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖形成的孢子是那一种？孢子是怎样着生的？
3.放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养 基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌
的重要依据。
三 实验材料
1．菌种
（1）啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母;
（2）毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉;
（3）白色链霉菌、红色链霉菌
2. 0.1%的美蓝染色液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液, 芽孢染色液、无菌水、盖玻片、载玻片，接种钩，接种铲。
四 内容与步骤
1．酵母菌
(1)菌落特征和菌苔特征的观察。观察菌落表面干燥或湿润、隆起形状、边缘整齐度、大小、颜色 等，并用接种环挑菌，注意与培养基结合是否紧密。取斜面培养的啤酒酵母、面包酵母、热带假 丝酵母观察菌苔特征。
(2)个体形态与出芽生殖：采用水浸片法。即在载玻片上加一滴 0.1%美蓝染液（或一滴蒸馏水），挑取少许啤酒酵母与染液混匀，将盖片斜置，慢慢放下，以免产生气泡，用滤纸片吸取多余是水分，即可观察酵母菌的形态和出芽方式。
2.霉菌落特征的观察
2.1用肉眼观察生长在 PDA琼脂平板上的各种霉菌菌落， 并根据下列要求对每种霉菌的菌落特征加以描述。
(1)菌落的大小：局限生长或蔓延生长，菌落的直径和高度。
(2)菌落的颜色：正面和背面的颜色，培养基的颜色变化。
(3)菌落的形态 ：棉絮状 、 网状 、 疏松或紧密 、 同心轮纹 、 放线状的皱褶等 。
_ 2.2霉菌个体形态的观察
(1)乳酸石炭酸制片法观察：由于霉菌的菌丝较粗大，而且孢子容易飞散，如将菌体置于水中容易变形，故观察时不用水浸片法制片，而将其置于乳酸石炭酸溶液中，使细胞不易干燥，并有杀菌作用，有时为了增加反差在乳酸石炭酸溶液里溶入棉蓝制成乳酸石炭酸棉蓝染液。
步骤： 在干净的载玻片上加一滴乳酸石炭酸，用接种针从菌落边缘处取小量带有孢子的菌丝置于 液体中，再小心地把菌丝放开，然后用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。
(2)插片培养观察
方法： 将已灭菌的盖玻片斜插入培养基平板上，一半露在外面，然后沿盖玻片与培养基交接处接 种霉菌孢子悬液。24℃~26℃恒温培养 2~4 天。然后，乳酸石炭酸制片、镜检观察。
[注意事项]
①制片时，应用接种铲取菌落边缘处带有孢子的菌丝。
②取的菌丝或者孢子要少，如果铲太多，反而不易观察。
③标本片制好后，先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。
3.放线菌
3.1菌落形态及菌苔特征的观察：观察放线菌菌落的表面形状、大小、颜色和边缘等；用接种环挑取菌落，注意放线菌在基质上着生紧密情况。区别基内菌丝、气生菌丝及孢子丝的着生部位，取斜面培养的白色链霉菌、红色链霉菌观察菌苔特征，注意孢子颜色，营养菌丝颜色和色素分泌情况等。
3.2个体形态特征观察：用接种铲连同菌苔一薄层培养基取下一小块，平置于载玻片上进行观察，注意放线菌菌丝直径大小，孢子丝的形状。在低倍镜下观察基内菌丝和气生菌丝，在高倍镜下观察孢子丝。
[附：放线菌插片培养法] 首先将放线菌菌种制成一定浓度的孢子菌悬液后，吸取 0.2ml 放在供放线菌生长的高氏培养基平板上，用玻璃棒涂布均匀，然后将灭过菌的盖玻片以 45 度角斜插入固体培养基中，置 28—32℃下培养，3—5 天后取出盖玻片放在载玻片上镜检，可见放线菌生长的个体形态。