esRAGE酶联试剂盒操作手册
(测定范围:0.0312~2ng/ml)
产品介绍和操作概要:
高级糖基化终产物(AGEs)与它特异性受体(RAGE)的结合在糖尿病血管并发症的发生发展中扮演重要角色.esRAGE由RGAE的RNA选择性剪切而成,它能捕获结合AGE,从而抑制AGE对内皮细胞的损伤,发挥保护功能.在人体循环系统内发现esRAGE到目前还是第一次,而高灵敏度,高特异性的esRAGE三明治夹心ELISA试剂盒的问世,无疑有助于研究esRAGE与个体对患糖尿病血管并发症的抵抗能力是否存在相关性.
试剂盒中的酶标板包被了抗人esRAGE捕获抗体,且封闭了非特异性结合位点的预包被孔板.样品或标准品中的人esRAGE可被孔板中的捕获抗体捕获结合.在洗去未结合的蛋白后,加入生物素标记的识别抗体,它能够识别并结合孔中已被免疫固定的人esRAGE.再经过浸洗将非特异结合的识别抗体洗去后,先后加入底物的催化剂亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP)和底物溶液(TMB).最后加入终止液终止酶-底物反应.孔中显示的颜色深浅与标准液或样品中人esRAGE的含量成正相关.因此,用若干已知浓度的人esRAGE标准品可以绘制出标准曲线,样品中esRAGE的含量可以根据曲线来确定.
样品适用范围:
血清,血浆,其他生物液体.样品中esRAGE的浓度应在试剂盒可测试的范围内.
康肽生物科技(北京)有限公司承诺:本操作手册的内容信息与所提供的试剂盒产品一致.客户在购买前应根据实际需要考虑试剂盒是否符合要求.
试剂盒组成:
将试剂盒里所有试剂保存于4℃.请勿冷冻保存.
1.20×实验缓冲液 1瓶(50ml)
2.预包被的微孔板 1个
3.人esRAGE标准品 1管(1ng)
4.生物素标记esRAGE抗体 1管 (100μl)
5.阳性对照 1管 (250μl)
6.亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP) 1管(10μl)
7.显色底物(TMB) 1管(12ml)
8.终止液(2N HCl) 1管(15ml)
9.醋酸纤维素封板膜(APS) 1张
其他材料和试剂:
实验还需自备以下材料和试剂:
-微量移液器和移液吸头
-96孔板洗板机或手工操作洗板排枪(推荐使用)
-纸巾或吸水纸
-水平摇床300-400rpm(推荐使用)
-可以检测450-650nm范围内吸光度的酶标仪
-封闭性较好的容器(15ml或更大的试管)
试剂的准备:
1.1×实验缓冲液.用950ml dH2O将20×的实验缓冲液稀释成1×.1×实验缓冲液用于浸洗微孔板,也可用于稀释所有抗体和标准品.若储液瓶底出现结晶,可将其放入37℃水浴中使结晶充分溶解后再进行稀释.稀释好的1×实验缓冲液4℃保存.
2.生物素标记抗体.离心,使吸附在管盖和管壁上的粉末沉于管底,小心开盖避免粉末撒出. 用100μl 1×实验缓冲液重溶生物素标记抗体粉末,漩涡振荡,使粉末充分被溶解.使用前用实验缓冲液按1:200稀释成工作液.
3.亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP) .离心将管壁和管盖上的液体甩下,使用前用1×实验缓冲液按1:4000稀释成工作液.
标准液的制备:
离心,使吸附在管盖和管壁上的粉末沉于管底,小心开盖避免粉末撒出. 在标准品管中加入500μl 1×实验缓冲液,摇匀后室温下至少放置10分钟使粉末充分溶解.使用之前摇匀离心.原液的浓度为2ng/ml.
按照以下方法配制标准液:
标准管号
标准液体积
1×实验缓冲液体积
浓度
原液
粉末
500μl

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