中国病理生理杂志. 2002,18(10) :1271-1275
复方丹参滴丸对离体大鼠缺氧/复氧心肌的保护作用
赵雅君 史从宁 王孝铭 朱世军 马丽英 姜晓姝 娄延平 王丽娜 李全凤 徐长庆
(哈尔滨医科大学病理生理学教研室
黑龙江哈尔滨
150086)
摘
要
目的和方法: 采用 Langendorff 大鼠离体心脏灌流技术, 制备心肌缺氧/复氧损伤
模型,分别在缺氧前及缺氧后,用复方丹参滴丸及消心痛对心肌给予保护,利用高效液相色 谱仪(HPLC)测定离体大鼠心肌组织中的高能磷酸化合物的含量变化,利用 H—600 透射电子 显微镜对心肌细胞超微结构进行观察.本实验共分 6 组:正常对照组;单纯缺氧/复氧组; 复方丹参滴丸前,后保护组;消心痛前,后保护组.结果:①单纯缺氧/复氧组心肌组织中 AMP,ADP,ATP 及 AN 含量均明显低于正常对照组(P<0.01).②复方丹参滴丸前,后保护组 大鼠心肌组织内的 AMP,ADP,ATP 及 AN 含量均高于单纯缺氧/复氧组(P<0.01),也相应高 于消心痛前,后保护组(P0.05).③消心痛 前,后保护组的 AMP,ADP,ATP 及 AN 含量均低于正常对照组(P<0.01).电镜结果也证明复 方丹参滴丸对缺氧/复氧心肌细胞超微结构具有明显的保护作用.结论:复方丹参滴丸无论 在缺氧前预灌注时及缺氧后再灌注时给予,均能通过提高心肌组织中高能磷酸化合物的含 量,保护心肌细胞超微结构来保护心肌,其保护效果优于消心痛. 关键词 丹参;心肌;低氧;能量代谢;心肌超微结构;大鼠 R331.3 1
+
中图分类号
文献标识码
A
心肌缺血再灌注损伤主要包括 4 个方面的病理生理学改变: 再灌注性心律失常, 心肌收 缩功能障碍,心肌细胞坏死以及冠状微循环障碍[1].丹参是一种"活血化瘀"药物,目前临 床已广泛用来治疗心绞痛, 心肌梗塞等疾患. 利用固体分散方法制成的新型复合剂复方丹参 滴丸,具有药物溶出速度快,生物利用度高等优点.为进一步探讨复方丹参滴丸对缺氧/复 氧心肌的保护作用及其机制,本文采用 Langendorff 大鼠离体心脏灌流技术制备心肌缺氧/ 复氧模型,利用高效液相色谱(HPLC)测定离体大鼠心肌组织中的高能磷酸化合物的含量变 化,利用 H—600 型透射电子显微镜对心肌细胞超微结构进行观察.
材料和方法
1 仪器 日本岛津 LC—6A 型高效液相色谱仪(HPLC),UV-VIS 分光光度检测器,C—R3A 数据 处理机,色谱柱 Hypersi;ODS2(5mm×150mm,5m 颗粒,英国产,大连依利特科学仪器 有限公司装柱);CSF—1A 超声波细胞粉碎器;低温离心机;H—600 型透射电子显微镜(日
本). 2 试剂 ATP, AMP: 美国 Sigma 公司产品; ADP: 德国产品; 硫酸氰四丁胺(tetrabutylammonium hydrogen sulfate, TBAHS):美国 Aldrich 化学公司产品;复方丹参滴丸:天津天士力制药公 司. 3 色谱条件 流动相为 215mmol/L KH2PO4, 2.3mmol/L TBAHS 与 3.5%乙腈组成,pH 为 6.25.流速 为 0.7ml/min.紫外可见分光检测器,波长为 210nm. 4 实验分组及步骤 Wistar 大鼠 42 只,体重 250～280g,雌雄不限,随机分为 6 组,每组均为 7 只.①正 常对照组(control group):大鼠心脏离体后接在灌流装置上持续灌流 75min.②单纯缺氧/复 氧组(A/R group):大鼠心脏离体后接在灌流装置上先预灌 15min,然后停止灌流,保持心 脏温度恒定在 37 C,在无氧,无灌流液的条件下旷置 40min,再恢复灌流 20min.⑦复方丹 参滴丸前保护组(pre—DS group)及复方丹参滴丸后保护组(post—DS group): 分别在预灌时或 再灌时加入复方丹参滴丸, 其它处理同单纯缺氧/复氧组. ④消心痛前保护组(pre—ID group) 及消心痛后保护组(post—ID group):实验过程同复方丹参滴丸前,后保护组,只是将保护剂 改为消心痛.实验时复方丹参滴丸及消心痛分别溶解于灌流液中,浓度分别为 20 mg/L, 50g/L. 5 动物模型及实验步骤 大鼠用 0.6%戊巴比妥钠(45mg/kg 体重)腹腔注射麻醉,同时腹腔注入 0.2%肝素 20mg /kg.动物麻醉后按常规开胸取心,心脏取出后立即放入盛有预冷灌流液的平皿内,用冷灌 流液冲掉残留血液,并迅速移到 Langendorff 灌流装置上,灌流液为 Krebs-Hanseleit 磷酸缓 冲液,灌流压为 88kPa.灌流前用 95%氧气和 5%二氧化碳混合气体向灌流液中平衡 15min, 在灌流过程中以 1 个大气压将上述混合气体持续向储液瓶灌流液内补充. ①灌注结束时, 取 心脏左室立即用在液氮中预冷的金属夹板将心肌组织夹成冰冻薄片,迅速称取 100mg 心肌 组织,加入预冷的 0.42mol/L 高氯酸制成匀浆,再加入 1mol/L 氢氧化钾中和,然后用超声 波细胞粉碎器将线粒体膜打碎,使能量物质全部释放于溶液中(以上操作过程均在冰水中进 行).然后 3000r/min 离心 15min,上清液用 0.2m 微孔滤膜过滤,取 10L 滤液上柱分析. ②每组随机取 3 只大鼠.于心脏灌流结束时,在心脏左室游离壁处取材,在冷的 4%戊二醛 —磷酸缓冲液中切成 1mm×1mm×1mm 的小块预固定,经脱水,包埋,超薄切片,染色后在 H-600 透射电镜下对心肌细胞超微结果进行观察. 6 统计学处理 利用 HPLC 说明书中所提供的 ID 文件两点标准曲线法(绝对标准曲线法)定量计算.所 得数据均用 x ± s 表示,组间差异显著性用 t 检验进行判定.

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