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内蒙古农业科技 2 O ( )3 — 3 0 6 2 :2 3
In rMo g laAgiutrlS in eAn T c n l g ne n oi r l a ce c c u d e h oo y
脉冲场凝胶电泳在 B C A 文库插人片段分析中的应用
詹 勇华 , 陈创 夫 . 高剑峰 z 王金 富 ,
(. 1新疆 地方与 民族 高发病实验室 , 新疆 石河子 8 2 0 ;. 3 0 3 2 石河子大学 生命 科学学院 , 新疆 石河子 820 ) 3 0 3
摘
要 : 冲 场凝 胶 电泳 作 为 一 种 分 离 大 片段 DA的 方 法 . 基 因 组 文 库 的 构 建 及 其 文库 鉴 定 中是 不 可 缺 少 脉 N 在
的 实验 技 术 . 刺 用脉 冲 场疑 胶 电泳 对 已构 建 好 的 B G文 库 进 行 了插 入 片段 大 小 分 析 . 果 显 示 : 用 脉 冲 场 A 结 利 疑 胶 电 泳 分 析 后 , 库 的 平 均 插 入 片段 大 小 为 13 b 符 合 文 库 的 要 求 . 文 3K . 关 键 词 :^ B C文 库 ; 冲 场凝 胶 电 泳 : 脉 文库 鏊 定
中田分类号 : 7 1 Q 8
文献标识码 : A
文章编号 :0 7 0 0 (0 6 0 - 0 2 0 10 — 9 7 2 0 }2 o 3 — 2
现代生 命科 学 中的重 大 突破 和进展 均得 益于 新 技术 ,新 方 法 的应 用 .脉 冲场 凝胶 电泳 ( sd 1 e ~l
2 结果 与分 析 随 机 挑 取 了 一 定 数 量 的 B C 克 隆 . 提 取 A
Fe e Eet poeiP G )作 为一 种 新 型 的 B idG l lcr hrs ,F E l o s AC质 粒 D A并 进 行 N t 酶切 分 析[ 图 1 N ol S l . 显 大 片 段 D A分 离 的 方 法越 来 越 受到 人 们 的重 视 . 示 了部分 克 隆的 酶切 产 物脉 冲电泳 结 果 . 10个 N 0 0 1 它最 初 用于 分离 大 片段 D A分 子, N 其原 理是在 B C克 隆 的插 入 片段 大小 分 布如 图 2所 示 . A 统计
.
凝 胶 上外 加 正 交 电场, 大 片段 D A分 子能 够在 使 N
结 果 表 明 文 库 的平 均 插 入 片段 大 小 约 为 1 3k , 3 b 非 重组 克 隆 占 32 .%,插 入 片 段 在 10 b 以上 的 0k
克 隆 占 8 %. 4
B AC
交替 变化 的 电场 中通过 重新 定 向在狭小 曲折 的凝
胶 中不 断 向前 运 动而分 离1 利用 脉 冲电泳 分离 大 2 1 . 片段 D A分 子 的原 理 为 基 因组 文 库 的构 建 及 其 N
相应 基 因组 的研 究提供 非 常大 的作用[ 3 1 . l 材 料和 方 法
11 材 料 .
2)k I b 0
111 样 品 中国 美利 奴 细 毛羊 B C文库 . .. A
5l o【 b 83 b -k
11 .. 主要 仪 器 和试 剂 Bo R dI 2 i— a I 冲场 凝 I脉 胶 电 泳 , E T 摇 床 , oI 制 性 内切 酶 f 自 Z NA N t限 购
Po g rmea公 司)P G a b a D A ld e re ,F E l d N a d rMak r m ( 自 Bo R d公 司) 购 i— a .
12 方 法 .
洼 : P G a MaDN de; M 外 . 余 泳 道 均 为 随 机 挑 M:F Elml A l d r 除 a 其 取 的 B G 克 隆 的 N tI 切 图 谱 ; 有 克 隆 共 有 的 83b的 带 为 A o 酶 所 .k
经 N 酶 切 的 B G 载 体 p CI A t oI A C B C
圈 l 随 机 挑 取 的 B C克 隆 的 N t 蕾 切 分 析 A oI
随机 从 3 4孔 的 培 养 板 中 挑 取 一 定 数 量 的 8 克 隆 , 量提 取 质粒 D A.按 下述 体 系进 行 N t 小 N o I酶切 分 析 : A 2 L B C质 粒 D A I L 0 oI N ,I 1 ~N t 酶 ~ 切缓 冲液 , . 0 ~ S 03 lU LN t 加 01 10 B A,. L L 0 / o , I 水 至 l .3 ℃温育 3 .每 管 加 入 2 L x N 0 7 h ~ 6D A

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