第 23 卷 第 2 期 2006 年 2 月
应用化学 CHINESE JOURNAL OF APPLIED CHEMISTRY
Vol. 23 No. 2 Feb. 2006
氨基荧光素的合成, 分离和表征
潘惠英 葛凤燕 陈立功 *
天津 300072)
( 天津大学药物科学与技术学院
摘
要
对 5-氨基荧光素的合成进行了系统的研究.以 4-硝基邻苯二甲酸, 间苯二酚, 氯化锌为原料合成硝
基荧光素, 收率为 85. 0% ; 再分别采用硫化钠和硫氢化钠混合物, 多硫化钠, 氯化亚锡, 氢气和骨架镍还原所 得硝基荧光素混合物, 得到 5 6) ( -氨基荧光素混合物; 在质量分数为 6% 的盐酸中重结晶分离得到了 5 位和 6 位氨基荧光素异构体, 其收率分别为 39. 6% 和 14. 5% .用荧光分光光度计测定了 5-氨基荧光素的荧光强 度, 最大激发波长和最大吸收波长.同时用 HPLC 检测了产物纯度, 产物结构经红外光谱, 核磁共振谱, 质谱 确证. 关键词 氨基荧光素, 硝基荧光素, 还原, 分离 文献标识码: A 文章编号: 1000-0518 2006) ( 02-0193-05 中图分类号: O626. 2
氨基荧光素 aminofluorescein, ( 简称 AF) 是荧光素类染料中重要的荧光探针之一, 尽管荧光强度仅
[1] 氨基荧光素广泛用于重要荧光探针如 为荧光素的 1 / 150, 但其衍生物如乙酰氨基荧光素 发强烈荧光. [2] [3] C12-荧光黄 的合成, 而这些荧光探针在蛋白质结构分析鉴 异硫氰酸荧光素, 马来酰亚胺荧光素 , [15] [4] [3] 核酸和核苷酸分析测定 , 生物膜结构以及脂质转运和代谢动力学 研究等领域中都得到广泛 定 ,
应用.目前, 国内关于氨基荧光素以及衍生物的研究报道主要侧重于其在生物分析中的应用, 而国外关
[4, 8, [6] 于其合成研究的报道较多.主要有高温熔融-还原法 5, 9], 微波辐射法 等.但高温熔融-还原法存在 [10] 酯化产率低, 分离纯化困难等问题 , 且产物纯度不高, 从而降低了生物标记的灵敏度, 影响了它在生 [7] 物分析中的广泛应用.微波辐射法反应时间短, 但存在收率低, 安全性差等问题 .本文以 4-硝基邻苯
二甲酸和间苯二酚为原料缩合制备 5 6) ( -硝基荧光素混合物, 直接还原得到 5 6) ( -氨基荧光素, 并利用
[13] 对其结构进行了表征, 并测定了其 其在稀盐酸中溶解性能的差别 分离得到 5 位和 6 位氨基荧光素,
纯度.该方法合成路线比传统酯化分离结晶方法短, 5-氨基荧光素的收率提高了 1 倍. 目标化合物合成路线如 Scheme 1 所示:
Scheme 1
The synthesis of aminofluorescein
2005-04-16 收稿, 2005-08-02 修回 通讯联系人: 陈立功, 1962 年生, 男, 教授;E-mail: ligongchen@ tju. edu. cn;研究方向: 药物及其中间体合成
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应用化学
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1. 1
实验部分
仪器和试剂 YRT-3 型熔点仪 天津大学精密仪器厂) BIO-RAD 3000 型红外光谱仪 美国) 970CRT 型荧光分 ( ; ( ;
光光度计 上海分析仪器厂) BRUKER AV400 型核磁共振仪 瑞士) LCQ Advantage MAX 质谱仪 美 ( ; ( ; ( 250 硫氢化钠, 骨架镍为 国) Agilent 1100 液相色谱仪 美国) 色谱柱为 ODS-C18 反相柱, mm × 4. 6 mm; ; ( , 自制, 其余试剂均为市售分析纯或化学纯. 1. 2 合成方法 5 6) ( -硝基荧光素的合成: 向装有机械搅拌装置的四口瓶中分别加入 4-硝基邻苯二甲酸 (10. 00 g, 0. 045 mol) 间苯二酚 , (12. 44 g, 113 mol) 0. 和氯化锌 (13. 62 g, 100 mol) 混匀, 0. , 油浴加热至 120 ℃ 使 之熔融, 搅拌, 加热至 150 ℃ 反应 2 h, 再升温至 160 ℃ , 在该温度下搅拌至熔融物固化不能被搅动为止. 冷却至室温, 加入 150. 0 mL 0. 6 mol / L 盐酸回流 1 h, 趁热过滤, 滤饼再用 50. 0 mL 热水回流, 过滤, 滤饼 用热水充分洗涤至中性, ℃ 左右干燥, 100 得到黄褐色产物 14. 50 g, 收率为 85. 0% . 5 6) ( -氨基荧光素的合成: 将九水硫化钠 (8. 70 g, 036 mol) 0. 溶于 125. 0 mL 蒸馏水中, 加入硝基荧 光素 (3. 77 g, 010 mol) 使之全溶, 0. , 再加入自制硫氢化钠 (3. 04 g, 054 mol) 回流 24 h, 0. , 冷却, 滴加冰 醋酸至沉淀不再产生, 静置过夜, 过滤, 得到红褐色粗氨基荧光素, 收率为 93. 1% . 5 位和 6 位氨基荧光素的分离: 粗氨基荧光素用 150. 0 mL 质量分数为 6% 的盐酸加热回流 6 h, 趁 热过滤除去生成的硫.滤液冷却后置于 4 ℃ 下 24 ～ 48 h 析出固体.过滤, 50. 0 mL 质量分数为 6% 用 的盐酸重新回流.过滤, 得到暗红色针状晶体, 溶于 70. 0 mL 0. 5 mol / L NaOH 溶液, 再加入冰醋酸调节 pH 值至 4, 析出大量沉淀.过滤, 真空干燥 (40 ℃ ) 得到 5-氨基荧光素 1. 37 g, , 收率为 39. 65% .熔点高 于300 ℃ . 再加入 150. 0 mL 10% 的盐酸加热回流, 趁热过滤, 滤液 将上述除去 5-氨基荧光素的滤液浓缩至干, 置于 4 ℃ 下, 析出沉淀, 过滤.再用 75. 0 mL 6% 的盐酸加热回流, 过滤, 固体用 70. 0 mL 0. 5 mol / L NaOH 溶液溶解, 加入冰醋酸调节 pH = 4, 析出沉淀, 真空干燥, 得到土黄色 6-氨基荧光素 0. 51 g, 收率 为 14. 5% 发射谱图见图 1) ( .

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