RNA用户手册
a researcher's guide to RNA
了解RNA
细胞中的信息分子-RNA是种比较脆弱的分子物质, 很容易在许多不同的机理 作用下降解.
细胞内含有包裹RNase的溶酶体,用来降解不需要的mRNA.当细胞或组织死亡时,这些溶酶体会破裂, 释放其中的RNase到细胞质空间,最终降解RNA. 环境RNase很可能污染实验人员的手套,试剂,移液器,甚至是手,并导致研究者最不愿看到的结果, RNA被惊人地降解了. 此外,RNA当暴露在二价阳离子比如钙离子或镁离子时,加热会催化羟基群提供电子对磷酸骨架发起亲 核性攻击,进而导致-RNA降解.
成功进行RNA工作所需要的各种各样试剂盒与试剂, 这些Life Technologies公司 都有提供. 在接下来的篇章里请您分享我们的RNA研究技术介绍和解决方法, 如 果您有问题, 欢迎联系我们!
目 录
了解RNA 目录 从RNase-free材料开始 RNA提取 防止RNA降解 芯片实验RNA扩增 体外转录 RNase保护 从总RNA中纯化mRNA RNA产物清洁 Northern Blotting 附录 RNA分离工具 13 01 02 04 05 06 07 09 10 10 12
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从RNase-free材料开始
从RNase-free材料开始所有工作,经常是帮助RNA实验成功的最容易的一条途径.无需高压灭菌,无需DEPC 处理,Ambion提供的是彻底简单易用的解决方法. 技巧 提示 最方便的清洁RNA方法是使用MEGAclear Kit(见第11页).然而,如果你的实验室暂时没有这个试剂盒,较简 陋的RNA沉淀操作可以代替成为快速的RNA清洁方法. 1. 往提取的RNA溶液中加入1/10体积盐溶液*. 2. 加入2.5倍体积100%乙醇. 3. 充分混匀并冷冻.至少在冰上孵育15分钟,-20℃ 冷冻过夜会提高产物得率. 4. 离心5-15分钟. 5. 弃上清.
* 醋酸钠(3M)可用于所有沉淀应用.醋酸铵(5M)适合绝大多数RNA沉淀应用,但不适合下游激酶反应实验,因为氨基会抑制激酶反应. 小RNA沉淀操作,请查询: http://www.ambion.com/techlib/misc/acetate_precip.pdf
6. 使用70%乙醇洗涤沉淀.弃液体. 7. 空气中干燥10-15分钟直到残留的乙醇蒸发,注意 不要过度干燥,因为过度干燥会让沉淀难以溶解. 使用缓冲液比如Tris-EDTA或THE RNA Storage Solution(Ambion)溶解沉淀.
用于缓冲液和反应准备的水
无核酸酶水 你使用的水的好坏关系实验成败.用DEPC处理水耗 费时间,而且DEPC需要在通风橱内操作.直接使用 我们提供的商品化,经过核酸酶污染测试的无核酸酶 水能帮您省却此类麻烦.对那些习惯使用DEPC的, 我们还提供商品化的DEPC处理水,同样经验证确保 无核酸酶.
AM9930 AM9932 AM9920 AM9922 AM9935 Nuclease-free Water Nuclease-free Water DEPC-treated Water DEPC-treated Water RT-PCR Grade Water 500 ml 1L 500 ml 1L 10 x 1.75 ml
对水纯度有超高要求的客户,请尝试我们的RT-PCR Grade Water,不仅确保无核酸酶还确保不含任何真 核或原核生物DNA,可以用来检测实验室内的DNA污 染源.
所有nuclease-free和DEPC处理水都有更小或更大的包装可选.
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用于RNase-free工作的缓冲液和塑料耗材
无核酸酶缓冲液与塑料耗材
Buffer Kit Contains: 1M tris pH 7.0, 1M Tris pH 8.0, 5M NaCL, 1M MgCL, 0.5M EDTA pH 8.0, 2M KCL, 5M Ammonium Acotato (NH, OAc), and DEPC-troatod H2O 3M Sodiun Acetate 5M Ammonium Acetate Tris-EDTA (TE), pH 7.0 15 ml RNase-Free Conical Tubes (racked) 50 ml RNase-Free Conical Tubes (racked) 50 ml RNase-Free Conical Tubes (bagged) Non-stick RNase-Free Microfuge Tubes, 1.5 ml* RNase-Free Microfuge Tubes, 1.5 ml* Filter (Barrier) RNase-Free Pipette Tips (10 l, 20 l, 100 l, 200 l, 1000 l sizes) * 0.5 ml and 2.0ml tubes also available

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