淋巴细胞及小鼠肝癌细胞在给3H - TdR后,在蛋白质及RNA
上出现放射性; Goldspink等把类似现象归为两个原因.
(1)3H - TdR上的3H转移到某些氨基酸上,其后掺入蛋白质;
(2)3H - TdR可非共价地结合在蛋白质上,并指出后者可能
是主要机制[ 16 ].不同的组织掺入的非特异程度不同[ 17 ].这
就提醒我们用三氯醋酸不溶物消化后测得的3H - DNA比活
度偏高,因为其中有蛋白质,RNA的非特异掺入.
312 3H - TdR储存过程中会出现辐射自分解,产生杂质,将
标记到胞浆蛋白质上,所以要用新鲜的3H - TdR[ 17 ].
313 核苷酸磷酸化酶存在胞浆中,可降解3H - TdR ,抑制3H
- TdR掺入,所以要在掺入实验中注意核苷酸磷酸化酶的影
响,Rubini发现5 - RU可使3H - TdR不被核苷酸磷酸化酶降
解,提高狗骨髓细胞对3H - TdR的摄入.
314 掺入DNA的放射性与DNA合成速度相关,但不一定成
正比.Kasahara[ 18 ]发现3H - TdR掺入取决于细胞内外的TdR
的水平,而DNA合成速度不受影响.还有些影响DNA从头
合成途径,抑制主动运输3H - TdR的药物,如MTX ,烷化剂
Trenimon等,会增加或抑制3H - TdR的掺入,不影响DNA合
成速度[ 19 ].
315 3H - TdR掺入率与培养基种类,培养时间,培养温度,动
物种类年龄等有关,要做到实验条件的一致性,可比性.如
RPMI 1640培养基比Tc199马血清更有利于3H - TdR的掺
入[ 20 ].同一份标本37℃时比4℃培养下3H - TdR掺入率高
20倍[ 21 ].
316 用掺入分数(FI :即组织中DNA上的放射性与总放射性
之比)来表示掺入量比用比活度更好.
4 结语
3H - TdR掺入法是一种反映细胞增殖的快速简洁方法,
半衰期长,价廉,易于推广.虽然有一定缺陷,但只要注意干
扰因素的分析,合理设计,仍然会随着其它技术的发展,在基
因研究,干细胞研究等前沿科学中发挥作用.
参考文献
[ 1 ]朱寿彭,伦明跃13H - TdR体内滞留诱发生殖毒性1《癌变,畸变,
突变》杂志,1996 ,8(2):651
[ 2 ] Sawicki W , et al . High - speed autoradiography of3H - thmidine - labiied
nuclei . Histochemistry , 1977 ,52 :345.
[ 3 ] Panaaaayi GS , et al . Scintillation autoradiography - a rapid technique . J
Immunol Methods , 1972 ,2 :115.
[ 4 ]刘鼎新1放射自显影术1王世真,林汉,周前,主编1核医学和核
生物学1北京:科学出版社,1990 ,581
[ 5 ]王向宇,吴可贵,林好学,等13H - TdR掺入DNA技术在组织培养

下一页