!"#$%&胞外段在大肠杆菌中的表达和鉴定
孙!琳!吴秀丽!许!艳!于永利!王丽颖!(吉林大学基础医学院分子生物学教研室,长春"#$$%")
''中国图书分类号'()*''文献标识码'+''文章编号'$,,,-.*./(0,,1),2-,*,3-,4
[摘!要]!目的:获得&'(")*胞外段重组蛋白,研究其生物学功能,为肿瘤治疗提供实验依据.方法:利用+,-.(+从
&(/0细胞中获得&'(")*胞外段编码基因,将其克隆到原核表达载体12,-#%3中,并在45%"(62#)大肠杆菌中进行表达;以
亲和层析法对&'(")*重组蛋白进行纯化;利用纯化的&'(")*蛋白免疫家兔制备&'(")*多克隆抗体,然后对乳腺癌组织
进行组化染色.结果:在大肠杆菌45%"(62#)中成功表达了分子量为#$$$$的,78-&'(")*融合蛋白,经镍亲和层析一步纯
化所获得的蛋白质纯度9:$;,用,78-&'(")*融合蛋白免疫家兔获得的抗血清对乳腺癌组织的初步组化检测证明&'(")*
融合蛋白具有很好的生物学活性.结论:成功表达并纯化了具有生物学活性的&'(")*胞外段重组蛋白.
[关键词]!&'(")*胞外段;表达;鉴定
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[L7MN>@6E]!&'(")*A8>73BAHHEH37J 品;,3Z6NW聚合酶及限制性内切酶购自,3[3+3
作者简介:孙!琳(":0\年]),女,博士,主要从事基因工程研究;
通讯作者:王丽颖(":^_年]),女,教授,博士生导师,主要从事基因
工程研究,2-C3 H:MHK @I'C3 HLaHELAJELB@.
公司;6NW及.(+产物纯化试剂盒,W&V逆转录
酶,+N3G @购自.7 美生物工程公司;Q.,X为R IC3产品.
$O0'方法
$O0O$'+,-.(+!根据已知&'(")*的B6NW序列
设计一对引物:上游引物^c-XWW,,(W,,XWXX
X,(X,,(,XX,(W,X(WWX(,(,-#c,下游引物^c-
WWX(,,WXW(,XXX(WXWXWWWXX-#c.利用,7 O 试剂从&(/0乳腺癌细胞中提取细胞总+NW,并在
下列反应条件下进行逆转录::!H总+NW,"!H (J,)"_("$!C

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