生物学实验导论 - 生物学与生物技术 实验仪器基本原理及应用课程
实验讲义
(第二版)
中国医科大学实验技术中心
2007 年 8 月
生物学实验导论 - 生物学与生物技术实验仪器基本原理及应用课程
目
录
中心一部
实验 1 实验 2 离子交换层析分离蛋白质 凝胶过滤层析分离纯化蛋白质 3 4 6 10 12
实验 3 SDS-PAGE 法测定蚓激酶分子量 实验 4 实验 5 等电聚焦电泳法测定蚓激酶等电点 药物中新诺明的含量测定(HPLC)
中心二部
实验 1 125I 标记牛血清白蛋白 实验 2 游离甲状腺素(FT4)放射免疫测定 实验 3 液体闪烁计数器的使用 实验 4 放射性标记 PCR 技术及琼脂糖电泳 14 15 16 17
中心三部
实验 1 实验 2 实验 3 实验 4 实验 5 实验 6 实验 7 实验 8 实验 9 生物样品的电动组织匀浆制备 超声细胞破碎技术 分子生物学仪器系列实验 Ficoll 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 恒温振荡培养技术及仪器应用 显微操作技术 pH 计的校准及使用方法 紫外-可见光分光光度计测定核酸,蛋白 酶标光度计检测细胞增殖(MTT 法) 19 20 21 23 25 26 29 30 31 32 34 35 36
实验 10 细胞内钙离子浓度的荧光光度检测 实验 11 流式细胞仪的细胞周期检测 实验 12 流式细胞仪的淋巴细胞亚群分选 实验 13 光学显微镜光轴对中调置和常规维护措施
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实验 14 光学显微镜图像记录技术-显微照像 实验 15 生物样品的真空冷冻干燥技术 实验 16 DNA 样品的离心凝缩技术 实验 17 细胞离心涂片技术
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中心一部
实验 1 离子交换层析分离蛋白质
【实验目的】通过分离蚓激酶的实验,学习和掌握离子交换层析法的工作原理 和离子交换介质的选择;了解离子交换树脂的处理及转型;学习该实验方法的筛选 和基本操作技术. 【实验原理】离子交换层析是一种吸附层析,利用不同蛋白质表面电荷的差异 而达到分离,纯化蛋白质的目的.阴离子交换剂的电荷基团带正电,反离子带负电, 因此这种交换剂可以与溶液中的负电荷化合物或阴离子进行交换反应;阳离子交换 剂则反之. 【实验材料】0.05M Tris-HCl pH7.5,1M NaCl 0.05M Tris-HCl pH7.5,蚓激酶粗 提物,20%乙醇,1MNaOH,DEAE-Sepharose Fast Flow 柱,AKTA purifier 液谱纯 化系统,高速离心机,电子天平,试管,一次性滤器,2ml 注射器,2ml Eppendorf 管,冲洗瓶,玻璃滤器 【实验方法】 1 离子交换介质:选用 Hitrap DEAE-SepharoseFF 阴离子交换层析柱.蚓激酶的 pI 为 3.5~4.0,洗脱缓冲液为 pH7.5,此时 pI
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