第26卷第4期
2005年8月
西安交通大学学报(医学版)
JournalofXipanJiaotongUniversity(MedicalSciences)
Vol.26No.4
Aug.2005
◇技术方法◇
激光显微切割联合功能分类表达谱
芯片技术在脑缺血研究中的应用
田英芳1,魏朝明1,2,张蓬勃1,邱 芬1,陈新林1,刘 勇1
(1.西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室,神经科学研究中心,陕西西安 710061;
2.陕西师范大学生命科学学院,陕西西安 710062)
摘要:目的 探讨激光捕获显微切割分离大鼠脑微血管和神经元联合功能分类表达谱cDNA芯片技术在脑缺血研究
的应用.方法 激光捕获显微切割获取脑切片微血管和神经元,微量RNA提取试剂盒提取总RNA,线性扩增
mRNA,紫外分光光度计定量所得aRNA(antisenseRNA)扩增效率,基因特异性引物进行cDNA探针合成,进行芯片
杂交反应.结果 微血管和神经元各自捕获的总点数大约为8000～10000,T7线性扩增所得aRNA的量约为
500～1000ng,探针合成效率高,杂交反应格局清晰良好.结论 激光捕获显微切割,结合T7RNA线性扩增及基因
特异性引物线性扩增技术,可成功的应用于功能分类表达谱cDNA芯片的分析研究.
关键词:激光捕获显微切割;微血管;神经元;线性扩增;芯片
中图分类号:R741.02 文献标识码:A 文章编号:167128259(2005)0420395204
Lasercapturemicrodissectioncombinedwithfunctionalgrouping
cDNAmicroarrayanalysisincerebralischemia
TianYingfang1,WeiZhaoming1,2,ZhangPengbo1,QiuFen1,ChenXinlin1,LiuYong1
(1.KeyLaboratoryofEnvironmentandGenesRelatedtoDiseases,ResearchCenterofNeuroscience,
MedicalSchoolofXipanJiaotongUniversity,Xipan710061;2.Instituteofzoology,
ShaanxiNormalUniversity,Xipan710062,China)
ABSTRACT:Objective TodevelopamethodtoanalyzefunctionalgroupingcDNAmicroarraygeneexpression
inmicrovesselsandneuronsfromratbrainusinglasercapturemicrodissection(LCM).Methods Microvesselsand
neuronswerecapturedusingthePixCellⅡLCMinstrument.ThetotalRNAwasextractedfromtheLCMsamples
accordingtothemanufacturer'sprotocolofRNAqueous2Microkit.ThetotalRNAwereprocessedforoneroundof
T72basedRNAamplification;cDNAprobeweresynthesizedusinggene2specificprimerandlabeledforcDNA
microarrayanalysis.Results AmplifiedRNAfrommicrovesselsandneuronsallowedustomeasure96gene
expressioninfunctionalgroupingcDNAmicroarray.Conclusion LCMallowedustoharvestpuremicrovesselsand
neuronsfromtheirnativetissueenvironment,combinedwithmethodsofT7RNAamplificationandgene2specific
primeramplificationsothatwecananalyzefunctionalgroupingcDNAprofilinginLCMsamples.

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