版本号:QW-20110301-02-V1
动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 ( SN/T 2624-2010 )
动物源性食品(猪肉,猪肝,鸡蛋,虾,牛奶)中76种兽药(β-受体激动剂类,磺胺类,苯二氮卓类,硝基咪唑 类,苯并咪唑类,三苯甲烷类)残留量的制样和液相色谱-质谱测定.
样品前处理步骤:
样品提取:
准确称取5 g均匀试样 , 加入30 mL 乙腈 , mL 异 丙 2 醇 10 mL 0.1M 柠 檬 酸缓 冲溶液( pH 2.5, 含0.1M 氯化镁 )提取目标物,离心后上清液加入6 mL 异丙 醇, ℃ 的 温度下旋转浓缩至5 mL左右. 4 ℃下 40 在 8500 r/min 冷冻离心10 min,过0.45 μm滤膜.
HPLC-MS/MS条件:
a) 色谱 柱:C 1 8 柱 , 5 0 m m × 4 . 6 m m ( i . d . ) , 粒径 1 3.0 μm或相当者; b) 流动相: A:含 0.1% 甲酸的乙腈; B:含 0.1% 甲酸2mmoI/L乙酸铵水溶液+ 甲醇 (95+5,V1+V2) ; 流速: 600 μL/min ,梯度洗脱程序见表1; c) 柱温: 35 ℃; d) 进样量: 20 mL.
SPE活化:
CNW Poly-Sery MCX小柱(订货号:SBEQCA3279 ) 和CNW Poly-Sery HLB小柱 ( 订货号 SBEQ-CA3179)串联,分别用3 mL 甲醇,3 mL 水 和3 mL 上 述柠 檬酸缓冲液.
上样:
0.5 mL/min流速.
淋洗:
3 mL上述柠檬酸缓冲液 , mL水 , mL5 %甲醇水 3 3 液,抽干5min.
图1. 76种兽药标准物质的总离子流色谱图
扫描方式:多反应监测MRM;
1) 电喷雾电压(IS):4500 V; 2) 化气压力(GS1):448.175kPa(65Psi); 3) 气帘气压力(CUR):206.85kPa(30Psi); 4) 辅助气压力(GS2):482.65kPa(70 Psi); 5) 碰撞气压力(CAD):34.475kPa(5Psi); 6) 离子源温度(TEM):550℃; 7) 碰撞室入口电压(EP)为10V,碰撞室出口电压 (CXP)为13V.
洗脱:
4 mL甲醇和6 mL 5%氨水甲醇;在40±2℃ 的温度 下氮吹至干,用1.0 mL 含0.1%甲酸的5%甲醇水溶液 振荡溶解残渣后,过0.22 μm滤膜.
表1. 对虾,猪肉,猪肝,奶,蛋等5种食品基质进行76种兽药添加回收实验结果 检测限 (μg/Kg) 苯二氮卓类药物 硝基咪唑类药物 β-受体激动剂类药物 三苯甲烷类药物 苯并咪唑类 磺胺类药物 1.0 1.0 0.5 0.5 5.0 20.0 添加回收 浓度(μg/Kg) 1,2,4 1,2,4 0.5,1,2 0.5,1,2 5,10,20 20,40,80 回收率(%) 59.4-107.0 61.9-115.9 61.0-103.9 65.7-103.0 60.6-106.5 60.0-104.8
表2.梯度洗脱程序表 梯度时间(min) 0 3.0 4.0 7.0 9.0 13.0 18.0 18.5 23.0 流动相A (%) 0 25 40 50 50 100 100 0 0 流动相B (%) 100 75 60 50 50 0 0 100 100