生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报
ACF BOC M IA t I HYSC SNIA 0 2 4 5 : 3 A I HI C e OP B IA I C 2 0 ,3 ( ) 6 0—6 4 3 C 3 —3 0 Q N 110 /
纳升 电 喷雾 串联质谱 技术 对阻断 泛素通 路 诱导凋 亡相 关蛋 白质 的鉴定
王红霞 靳宝锋 王 杰 何 昆 杨松成 沈倍奋 张学敏
(军事 医学科学 院国家生物 医学分 析中心,北京 10 5 ; 0 8 0 军 事医学科学院基础 医学 研究所,北京 1 0 5 0 8 0)
摘要
应用毛细管液 相色谱一 电喷 雾一 四极杆一 飞行时间 串联质谱 和纳 升 电喷 雾一 四极 杆一 飞行时 间 串联 质谱 技 术, .
对阻断 白血病 细胞泛 素通路诱 发的 洲亡 相关蛋 白质进 行 了鉴定.通 过双 向 电泳发 现,蛋 白质斑点 H在 阻断 Mo e 7 白血病细 胞泛素通路 2h之后,表达量 明显增加 ,6h达到 最高.该斑 点经 MAI — OFMS肽质量指纹谱 分析未 . T - DI
获结果,但通过上 述 2 种串联 质谱技术获得 其胰蛋 白酶 水解肽段的 串联质 谱图和肽段的 全长序列 , 检索均 确认 经
为 Rh I oGD 白.进 一步发现阻断 泛素通路还 诱发 r另 2个斑 点出现 ,位于 H 点 附近,经 鉴定 为同 ' 白质, 8蛋 蛋 可能是不 同翻译后修饰 所造成 . .
关键词
蛋 白质组 ; 纳升 电喷雾串联质 谱 ; 胞 细
; 泛素通路
随 着两 种 崭新 的 尤其 适 合蛋 白质研 究 的软 电离
对 比检索 ,鉴定 蛋 白质 .与常 用 的 三 级 四极 电喷 雾
技术 E I电喷雾电离 ) MA D ( S( 和 L I基质辅助激光解 吸附电离) 的出现,质谱成 为现 代蛋 白质科学 中最 重 要 和 不 可 缺 少 的 组 成 部 分 _ 2.MAL . F 1 IJ DI TO — Ms 基 质辅 助激 光解 吸 附 电离 飞行 时 间质谱 ) ( 和 EI / ( S— MS 电喷雾 电离 串联 质谱 ) 代 了速 度较 Ms 取 慢, 灵敏度较差的 E m n d a 化学 降解法,用于分析和 鉴 定双 向 电泳 (D 分 离 所 获 得 的 蛋 白质 样 品 .这 2 E) 类方 法 的 一 般 步 骤 是 :先 从 2 E胶 上 切 下 待 分 析 D
的 蛋 白质 斑 点 ,用 胰 蛋 白 酶 对 蛋 白 质 进 行 胶 内 消
串联质谱相 比较,电喷雾一 四极杆一 飞行时间 串联 质 谱 具 有 更高 的 分 辨率 ,灵敏 度 和 测 定准 确 度 .本 项 目 在 阻 断 白 血 病 细 胞 泛 素 化 通 路 ( bq in ui t— ui poesmep twa ) 蛋 白质组 学 研 究 中对 用通 常 rtao ah y 的
的 MAL — OFMS方法 未 能 鉴定 的 疑难 蛋 白 质斑 DI T —
点 H,分 别 应 用 C p C E I / aL - S— Ms MS 和 n n - S— a oE I Ms MS技 术 成功 地进 行 了分析 和 互 相验 证 [ 0. / 3 -J
1 材 料和方法 ( tr l adMe o s Ma is n t d ) ea h
1 1 材 料 .
化,然后用质谱技术对消化后得到的多肽 片段进行
分析 ,首先 是 应 用 MAL —OFMS测 定 酶 解 后 的 DI T —
胰蛋白酶为德国 R ce oh 公司经修饰的测序级 的
酶 ( 品 编 号 1 105 ;色 谱 纯 乙 腈 为美 国 Fse 产 48 2 ) i r h
S i t i 品 ; 他试 剂均 为 国 产 分析 纯 .实验 用 ce ic产 nf 其
'
多肽 片段 , 得到肽质量指纹图谱并通过数据库检索
来对 蛋 白质 进 行 鉴定 .在 同一 实 验 中 未 鉴定 的蛋 白
质, 再用纳 升电喷雾 ( 四极杆一 飞行 时间 ) 串联 质谱 (aoE I / ) 联 机 (nl e 反 相 毛 细 管 柱 nn- S— MS 或 Ms o—n ) i 液相 色 谱 电 喷 雾 ( 极 杆一 行 时 间 ) 联 质 谱 四 飞 串

下一页