Hot Start Taq Plus DNA 聚合酶
SinoBio目录号:E018
近岸蛋白质科技有限公司
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产品描述:
本制品是Sinobio Taq Plus经特殊工艺处理后的制品.经处 理后的Taq Plus酶在加热至高温前,其聚合酶活性被抑制,从 而抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起 的非特异性扩增.Sinobio Hot Start Taq Plus在PCR反应最初的 DNA变性步骤后已恢复活性,因此无需特殊失活处理,在常 规PCR反应条件下即可使用.本制品适用于高特异性PCR反 应,Multiplex PCR,高GC含量(>60%),有二级结构等有较 强背景的基因组扩增的扩增和大规模基因组扩增检测.与Hot Start Taq DNA聚合酶相比,具有扩增长度增加(简单模板可 有效扩增20kb,复杂模板可有效扩增10kb), 保真度好的特点.
产品包装(A包装):
Hot Start Taq Plus (5U/ul) 50μl dNTP混合液(各10mM)* 200μl 5×Hot Start Taq Plus Buffer with Mg2+ 2ml *E018-02系列不含dNTP混合液
质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的 条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内,外 切酶污染.
活性定义:
在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成 为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位.
特点:
简便:无需要专门的高温复性步骤,在PCR第一次升温变 性过程中即可完全恢复活性,可在所有正常PCR程序中实现热 启动PCR的效果(图例一). 高效:有效减少了杂带及拖带产生,从而实现高特异性的 PCR. 灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片 段.
常用反应体系(50μl)
5× HS Taq Plus Buffer 上游引物 下游引物 dNTP(各10mM) 模板 Hot Start Taq Plus ddH2O 10μl 0.2-1.0μM(终浓度) 0.2-1.0μM(终浓度) 1.0μl 1-50ng(质粒) 10ng-1μg(基因组) 0.25μl(1.25U) 至50μl *Mg2+终浓度为2mM
产品用途:
1)高特异性PCR反应; 2)复杂模板扩增; 3)Multiplex PCR; 4)基因组扩增检测; 4)大片段PCR扩增反应 (可达 20 kb);
常用PCR循环
当扩增片段<3K时 94℃ 1分钟30秒 94℃, 30秒 30次循环: 57℃, 30秒, 72℃, 60秒/1kb 72℃ 5分钟 4℃ 保温
{
{
使用建议:
使用本试剂扩增得到的PCR产物3'端有一突出"A"碱基, 可直接克隆于T-vector中.
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp)时 20秒 94℃,5秒, 30次循环: 68℃,60秒/1kb 72℃ 5分钟 4℃ 保温 94℃
应用实例:
M 1 2 M
图例一) 50μl扩增体系中,以 50ng人基因组DNA为模板, Sinobio Hot Start Taq plus可对特 定基因片段(170bp)进行高特 异性扩增.
泳道M:DL2000 DNA Marker; 泳道1:Taq酶 1.25U; 泳道2: Hot Start Taq酶,1.25U
仅供科研使用,不能应用于人体
技术咨询电话:400-600-0940
www.sinobio.net