PCR 聚合酶
Taq DNA polymerase
浓度 2 U/μl PBZ0101‐1 200 U 40.00
PBZ0101‐2 1,000 U 150.00
PBZ0101‐3 10,000 U 1200.00
产品描述:
Taq DNA polymerase 是Thermus aquaticus 菌中的热稳定性 polymerase,分子量大约为 94kDa.在70-80℃,
镁离子存在的条件下,该酶可催化三磷酸脱氧核苷酸沿 5'→3'方向发生聚合反应,合成 DNA.它具有 5'→3'
外切酶活性,具有切口平移特性.Taq DNA polymerase 还具有模板非依赖性的末端转移酶活性,可在聚合
反应结束后在产物两端的 3'上再添加一个脱氧核苷.该活性中由于酶对 dATP 的利用较其余三种三磷酸脱氧
核苷酸为高,使得大部分 PCR 产物两边的 3'端各多加一个 A 碱基.使用本酶扩增的产物可以进行 TA 克隆.
Taq DNA polymerase 适用于常规的 PCR 扩增,real‐time PCR,引物延伸,DNA 序列测定,同位素和非同位素
的DNA 标记,具有 3'‐OH 的平末端 DNA 片段加 A 反应等.
质量检测分析:
除Taq DNA polymerase 特有的酶活性外,未检测到外源核酸酶活性;SDS‐PAGE 及考马斯亮蓝 R250 染色分
析酶蛋白纯度在 95%以上;30℃存放一周酶活性无明显下降;能有效扩增人基因组中的单拷贝基因.
酶贮存液组分:
50mM Tris‐HCl (pH 8.2 at 25°C),100mM NaCl,0.1mM EDTA,1mM DTT,50% glycerol.
10*PCR Buffer:200mM Tris‐HCl (pH 8.8 at 25°C),100mM KCl,100mM (NH4)2SO4,15mM MgCl2,1.0% Triton
R
X‐100.可以提供不含MgCl2的10*PCR Buffer及单独的50mM浓度的MgCl2.
保存条件及有效期:
‐20℃ 保存,有效期 12 个月.
来源:重组 taq 基因的大肠杆菌中表达并纯化的酶蛋白.
活性定义:在74℃条件下,30 min 内催化 10 nmol dNTPs 掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量定义为一
个活性单位.
注意事项:
10*PCR Buffer 冷冻后,Mg
2+
会形成一个浓度梯度,使用时应该完全化冻并混匀,离心后再使用.
反应实验例:
1. 在一个无菌PCR反应管中加入以下成分
成分名称 加入量 成分终浓度
10*PCR Buffer with MgCl2 5 μl 1*
dNTPs, 10mM each 1 μl 200μM each
上游引物 5–50 pmol 0.1–1.0 μM
下游引物 5–50 pmol 0.1–1.0 μM
DNA template variable <0.5 μg/50 μl
Taq DNA polymerase (2U/μl) 1μl 2 U/50 μl
用高压灭菌双蒸水补至终体积50 μl.实际操作中计算好需补加水的量后,建议先加水,然后按上述顺
序添加其它成分.充分混匀后,离心数秒使反应混合物沉到管底.然后将反应管置于PCR仪中进行扩增.

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