大肠杆菌热敏肠毒素 B 亚基的原核表达
及生物学活性分析
王会1,何孔旺 2
,陆承平 3
(1.山东省枣庄市畜牧兽医局,枣庄 277100;2.江苏省农科院兽医研究所,南京 210014;
3. 南京农业大学,南京 210095)
PROKARYOTIC EXPRESSION OF ESCHERICHIA COLI HEAT-LABILE
ENTEROTOXIN SUBUNIT B AND ITS BIO-ACTIVITY ANALYSIS
摘要:从大肠杆菌 K88(LT+,ST+)菌株中扩增热敏肠毒素 B 亚基基因(ltb),得到 454 bp 片段,克隆至 pMD18-T 载体后,
与pET32a(+) 定向连接,并转化入大肠杆菌 BL21 中,用IPTG 30 ℃诱导表达重组 LTB 蛋白.SDS-PAGE 显示,重组蛋白分
子量约为 34 kDa,超声波裂解后,表达产物主要以包涵体形式存在.经鉴定,纯化复性后的 LTB 蛋白保留部分与 GM1 结合
的生物学活性.
关键词:ltb 基因;原核表达;生物学活性
中图分类号:S852.44 文献标志码:A 文章编号:1674-6422(2011)02-0031-06
WANG Hui1
, HE Kong-wang2
, LU Cheng-ping3
(1. Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Zaozhuang, Shangdong Province, Zaozhuang 277100, China; 2. Institute of
Veterinary Medicine JAAS, Nanjing 210014, China; 3. Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)
Abstract: The gene of Escherichia coli heat-labile enterotoxin subunit B was cloned into plasmid pET32a vector and transformed
into E.coli BL21. The recombinant protein was expressed after being induced by IPTG at 30 ℃ . The SDS-PAGE indicated that the
molecular weight of recombinant LTB was about 34 kDa. Most of the recombinant protein existed in inclusion body after ultrasonication,
and part of protein regained bio-activity of binding with GM1 after renaturation.
Key words: LTB gene; prokaryotic expression; bio-activity
收稿日期:2011-03-08
作者简介:王会,女,硕士,兽医师,主要从事畜禽传染病预防免疫研究
通信作者:王会,E-mail:wanghui_726@126.com
大肠杆菌热敏肠毒素(Escherichia coli heat-
1abile enterotoxin,LT) 是产肠毒性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia col,ETEC) 的毒力因子之一,也是迄今为止已知的最强的黏膜免疫原
和黏膜免疫佐剂,但LT 强烈的致腹泻毒性限制
了它的实际应用 [1,2]
.LT 由1个A亚基 (LTA) 和5个B亚基 (LTB) 组成,LTA 是其毒素活性中心,
而LTB 是其免疫原性中心,无毒性,并且单独的
LTB 亦具有免疫佐剂活性.本实验构建 pET32a/
LTB 原核表达质粒,表达重组 LTB 蛋白,不仅
可用于亚单位疫苗研制,还可以进行黏膜免疫佐
剂的研究.
1 材料与方法
1.1 菌株与质粒 大肠杆菌 K88(LT+,ST+)
株,DH5α,BL21(code plus),原核表达质粒

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