中国农学通报 2011,27(9):191-194 Chinese Agricultural Science Bulletin 0 引言 益母草 (Leonurus artemisia (Lour.) S.Y.) 为唇形科 1 年或 2 年生草本植物, 是一种传统的中药植物[1] , 当 前已被广泛应用于妇科中成药的生产, 市场需求量很 大[2] .为满足需求, 国内部分地区已进行了规模化人 工栽培, 以补充野生采集的不足[3] .国内外对益母草 的研究开展的较为深入和广泛, 研究成果主要集中在 生药性状鉴别、 有效成分的提取分离、 药理与临床、 栽 培等方面.陈建华、 郭水良[4] 、 陈丽雅等[5] 从分子水平 对益母草的遗传性状进行了检验.但是, 对于人工栽 培的用种的研究却比较少, 哪里的种源好?原种到另 一个地区栽培后的表现怎样?产量高低?这些问题鲜 见报道. 本研究在调查研究益母草生产分布的基础上, 引 种国内19个种源地的益母草[5] , 通过对不同种源地益母 草干重和水苏碱含量这2个核心指标的分析测定[6] , 并 进行综合评价, 为筛选适于浙西南山区生长条件的优 质益母草种源奠定基础. 1 材料与方法 1.1 材料 试验材料来自浙江省内及省外 19 个种源地的益 母草种子.将采集的益母草种子放入封口袋密封, 保 基金项目: 浙江省面上科研项目 "益母草良种选育及优质高产规范化栽培关键技术研究" (2007C3308) . 作者简介: 姜华年, 男, 1965年出生, 浙江丽水人, 高校讲师, 硕士, 主要从事园艺植物栽培的科研与教学.通信地址: 323000 浙江省丽水市莲都区学 院路1号 丽水学院园林系, Tel: 0578-2271308, E-mail: jhn2585736@163.com. 收稿日期: 2011-02-23, 修回日期: 2011-04-18. 不同种源地益母草干重和水苏碱含量的测定 姜华年 (丽水学院, 浙江丽水 323000) 摘要: 为了解国内各主产区益母草干重和水苏碱含量的变化, 本试验收集浙江省内 (10 个) 和省外 (9 个) 益母草 (Leonurus Artemisia) 的种子在浙江丽水进行种植, 通过测定益母草的干重和不同时期水苏碱 含量, 来比较判断19个样本表现.结果表明: 供试样品中来自丽水莲都及周边地区的益母草干重明显 大于其他种源地益母草; 来自浙江省内的益母草苗期和花蕾期的水苏碱含量均明显高于来自其他省份 的益母草.干重和水苏碱含量均较高的为来自浙江省内的益母草.为此, 从药材质量和产量效益角度 考虑, 在浙西南地区人工栽培益母草应优先考虑从当地收集种源. 关键词: 益母草; 干重; 水苏碱含量; 种源选择 中图分类号: S-3 文献标志码: A 论文编号: 2011-0414 Determination of Dry Weight and Stachyose Alkali Content of Leonurus Artemisia from Different Sources Jiang Huanian (College of Lishui, Lishui Zhejiang 323000) Abstract: The aim was to study the dry weight and stachyose alkali content of Leonurus Artemisia. This study determined and analyzed the dry weight and stachyose alkali content of Leonurus Artemisia, through collecting Leonurus Artemisia seeds (10 samples from Zhejiang Province and 9 samples from other provinces) and planting these seeds in Lishui, Zhejiang Province. The results showed that: the dry weight and stachyose alkali content of the Leonurus Artemisia samples from Liandu and surrounding areas of Lishui were significantly higher than that of other samples. As a result, the seeds should be collected locally considering the quality and productivity. Key words: Leonurus Artemisia; dry weight; stachyose alkali content; provenance 存于阴凉通风处.种子于 2007 年2月28 日种植在浙 江丽水市莲都区碧湖镇.种植地为砂壤土, 土壤肥力 均匀, 排水良好, 每个实验小区面积为 3 m2 .19 个益 母草种源地如表1所示. 1.2 试验方法 试验材料采用随机取样法, 每个小区取5个点, 每 个点各选取不同种源地益母草5株, 剪除根系, 将地上 部称重, 得鲜重M1, 晾干后在46℃条件下烘至恒重后 称量M2, 取平均值. 水苏碱含量测定: 利用水苏碱母液制作标准曲 线.根据标准曲线求出标准线性方程为:y=-0.0223x+0.5694, 其中 y 为吸光度值, x 为水苏碱含 量(mg/mL) .水苏碱的提取, 采用索氏提取法[7] , 用分 光光度法测定水苏碱含量[8] .幼苗期水苏碱含量采用 全草测定, 花蕾期采用叶片测定[9] .在水苏碱含量测 定时, 先测出其吸光度 (Abs) , 然后通过标准曲线方程 求出水苏碱的含量. 1.3 数据处理与分析 利用 Microsoft Excel2003 和DPS3.01 软件对数据 进行处理分析. 2 结果与分析 2.1 地上部干重的测定结果与比较 由图 1 可以看出, 不同种源地的益母草的花蕾期 地上部分干重存在差异, 来自浙江莲都、 兰溪、 武义 (麻济) 、 平湖的益母草干重明显大于其他种源地益母草, 来自齐齐哈尔、 黑龙江鸡西、 辽宁、 宁夏的最小. 方差分析 (表2) 和多重比较结果显示: 来自浙江 省内以及江西、 甘肃的益母草之间干重差异不显著; 而 前述种源与宁夏隆德、 辽宁沈阳、 黑龙江齐齐哈尔的益 母草干重差异达显著性差异.地上部分干重是产量的 反映, 是评价种源质量的重要性状指标[10] .在种源的 选用中, 要充分考虑干重这个指标. 2.2 不同种源地益母草水苏碱含量测定 由图 2、 图3可以看出, 各种源地益母草水苏碱含 量存在明显的差别, 花蕾期的水苏碱含量均明显高于 幼苗期[11] , 并且幼苗期水苏碱含量高的益母草花蕾期 含量也较高, 幼苗期与花蕾期益母草水苏碱含量变化 趋势是一致的[12] .浙江莲都、 浙江武义 (柳城) 、 浙江兰 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 种源地 浙江宁海 浙江平湖 浙江上虞 浙江诸暨 (店口) 浙江诸暨 (赵家) 浙江义乌 浙江莲都 浙江武义 (麻济) 浙江武义 (柳城) 浙江兰溪 东经 121.42° 121.02° 120.87° 120.23° 120.23° 120.07° 119.92° 119.82° 119.82° 119.48° 北纬 29.52° 30.70° 30.03° 29.72° 29.72° 29.32° 28.45° 28.90° 28.90° 29.12° 序号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 种源地 云南昆明 江西南昌 甘肃陇西 宁夏隆德 河北张家口 辽宁沈阳 吉林长春 黑龙江鸡西 黑龙江齐齐哈尔 东经 102.73° 115.90° 104.62° 106.12° 114.87° 123.38° 125.35° 130.90° 123.97° 北纬 25.05° 28.68° 34.98° 35.63° 40.82° 41.48° 43.88° 45.31° 47.33° 表1 益母草种源地理位置 图1 不同种源地益母草花蕾期地上部分干重比较 · · 192 姜华年: 不同种源地益母草干重和水苏碱含量的测定 溪、 浙江义乌、 浙江武义 (麻济) 的水苏碱含量最高, 来 自吉林长春、 黑龙江齐齐哈尔、 黑龙江鸡西的水苏碱含 量最低.由试验数据可以看出, 来自浙江省内的益母 草的水苏碱含量均明显高于来自其他省份的益母草, 说明益母草具有明显的地域性. 方差分析 (表3、 表4) 和多重比较结果显示: 浙江 莲都的水苏碱含量的平均值最大, 其次浙江武义 (柳城) .浙江莲都除与浙江武义 (柳城) 的水苏碱含量差 异不显著, 与其他种源地均差异极显著; 浙江武义 (柳城) 与浙江兰溪、 浙江义乌差异不显著, 与其他种源地 差异极显著.黑龙江鸡西水苏碱含量的平均值最小, 其次为黑龙江齐齐哈尔和吉林长春. 变异来源 处理间 处理内 总变异 平方和 34.6550 25.0025 59.6575 自由度 18 38 56 均方 1.9253 0.6580 — F值2.926 — — 显著水平 0.0026** — — 表2 不同种源地益母草花蕾期地上部分干重方差分析 图2 不同种源地益母草幼苗期水苏碱含量 图3 不同种源地益母草花蕾期水苏碱含量 变异来源 处理间 处理内 总变异 平方和 21.6446 0.9459 22.5905 自由度 18 38 56 均方 1.2025 0.0249 — F值48.306** — — 显著水平 0.0000** — — 表3 不同种源地益母草幼苗期水苏碱含量方差分析 注: ** 为0.01水平极显著. 注: ** 为0.01水平极显著. · · 193 3 结论与讨论 试验结果表明, 在供试的 19 个样本中, 地上部分 干重和水苏碱含量2指标均较高的是来自浙江本地的 益母草; 而来自黑龙江、 吉林、 辽宁、 宁夏等外地的益母 草水苏碱含量普遍低于浙江当地种.因此, 在浙西南 地区, 人工栽培用种宜优先选用当地种源, 这是一个既 可以获得较高产量, 又能确保一定品质质量的合理选 择. 试验表明, 来自浙江省当地的益母草的水苏碱含 量普遍高于外省品种的含量, 这个研究结果与浙江省 中药研究所徐建中等[13] 研究基本一致; 幼苗期水苏碱 含量与花蕾期含量有相关性, 一般幼苗期含量高的, 到 花蕾期也表现较高, 这个结果与沈晓霞等[14] 的研究结 果一致.幼苗期水苏碱的含量变化和高低是童子益母 草[15] 生产选种的依据.这些实验结果为当地生产用种 源选择提供了依据, 也充实了益母草的基础研究.然而, 试验未对浙江莲都、 武义、 兰溪、 义乌的益母草在浙 江省以外区域的表现进行研究, 也未对干重和水苏碱 含量这 2 指标之间是否具有相关性进行研究, 因此难 以确认前述种源地益母草就是理想种源, 这也是本研 究不足, 有待开展更广泛深入的研究. 已有的研究表明, 益母草分布广泛, 区域适应性 强, 人工选择程度低, 遗传变异性大[16] , 开展益母草种 质中多指标成分的定量测定和指纹图谱等的定性测 定, 这是进行益母草品种定向培育的必然趋势. 参考文献 [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:化学工业 出版社,2005:203-204. [2] 厚毅清,王乃亮,欧巧琴,等.益母草属植物种子发芽、 细胞培养及其 化学成分研究进展[J].中国农学通报,2010,26(18):75-78. [3] 金欣,高言明,孙济平,等.从益母草主要有效成分分析看其人工种 植的必要性[J].中华现代中西医杂志,2009,7(4):285-287. [4] 陈建华,郭水良等.浙江省及其临近地区益母草的 RAPD 分析[J]. 浙江师范大学学报,200326(4):384-385. [5] 陈丽雅,赵鹂,白岩, 等.不同种源益母草遗传关系的分析[J].中国中 药,34(11):1343-1345. [6] 赵鹂,郭圣荣.双水相体系萃取分离-分光光度法测定益母草中水 苏碱[J].药物分析杂志,2010,30(1):1953-1955. [7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:化学工业 出版社,2000:564-566. [8] 卢日刚.分光光度法测定益母草冲剂中生物碱的含量[J].药学通 报,1986,21(9):522. [9] 安伟建.中药益母草有效成分提取和测定方法的研究进展[J].天津 药学,2003,15(3):68. [10] 刘善荣,王东雪,江泽鹏.不同肉桂种源苗期生长差异及质量评价 [J].林业科技开发,2008:276. [11] 张飞联,赵仕湘,吴爱娟,等.物候对益母草生长和总生物碱积累的 影响[J].中草药 2000,(31)5:371-372. [12] 晁志,王厄舟,周秀佳.益母草药材中生物碱含量与产地生态环境 的关系[J].第一军医大学学报,2000, 20(6):504-506. [13] 盛束军,徐建中,俞旭平.生长调节物质对益母草总生物碱积累的 调控[J].资源开发与市场,1999,15,(56):264-265. [14] 沈晓霞,盛束军,徐建中.环境因子对益母草总生物碱含量的影响 [J].浙江农业学报,2002,14(4):221-225. [15] 熊南燕,刘艳丽,孔增科.益母草不同采摘期不同用药部位中含盐 酸水苏碱的比较研究[J].时珍国医国药,2008,19(8):2004-2005. [16] 余琪,沈晓霞,沈宇峰,等.益母草种质资源遗传多样性的 AFLP 分析[J].中草药,2009.8,40(8):1296. 变异来源 处理间 处理内 总变异 平方和 189.9284 17.6438 207.5722 自由度 18 38 56 均方 10.5516 0.4643 — F值22.725** — — 显著水平 0.0000** — — 表4 不同种源地益母草花蕾期水苏碱含量方差分析 注: ** 为0.01水平极显著. · · 194
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中国农学通报 2011,27(9):191-194 Chinese Agricultural Science Bulletin 0 引言 益母草 (Leonurus artemisia (Lour.) S.Y.) 为唇形科 1 年或 2 年生草本植物, 是一种传统的中药植物[1] , 当 前已被广泛应用于妇科中成药的生产, 市场需求量很 大[2] .为满足需求, 国内部分地区已进行了规模化人 工栽培, 以补充野生采集的不足[3] .国内外对益母草 的研究开展的较为深入和广泛, 研究成果主要集中在 生药性状鉴别、 有效成分的提取分离、 药理与临床、 栽 培等方面.陈建华、 郭水良[4] 、 陈丽雅等[5] 从分子水平 对益母草的遗传性状进行了检验.但是, 对于人工栽 培的用种的研究却比较少, 哪里的种源好?原种到另 一个地区栽培后的表现怎样?产量高低?这些问题鲜 见报道. 本研究在调查研究益母草生产分布的基础上, 引 种国内19个种源地的益母草[5] , 通过对不同种源地益母 草干重和水苏碱含量这2个核心指标的分析测定[6] , 并 进行综合评价, 为筛选适于浙西南山区生长条件的优 质益母草种源奠定基础. 1 材料与方法 1.1 材料 试验材料来自浙江省内及省外 19 个种源地的益 母草种子.将采集的益母草种子放入封口袋密封, 保 基金项目: 浙江省面上科研项目 "益母草良种选育及优质高产规范化栽培关键技术研究" (2007C3308) . 作者简介: 姜华年, 男, 1965年出生, 浙江丽水人, 高校讲师, 硕士, 主要从事园艺植物栽培的科研与教学.通信地址: 323000 浙江省丽水市莲都区学 院路1号 丽水学院园林系, Tel: 0578-2271308, E-mail: jhn2585736@163.com. 收稿日期: 2011-02-23, 修回日期: 2011-04-18. 不同种源地益母草干重和水苏碱含量的测定 姜华年 (丽水学院, 浙江丽水 323000) 摘要: 为了解国内各主产区益母草干重和水苏碱含量的变化, 本试验收集浙江省内 (10 个) 和省外 (9 个) 益母草 (Leonurus Artemisia) 的种子在浙江丽水进行种植, 通过测定益母草的干重和不同时期水苏碱 含量, 来比较判断19个样本表现.结果表明: 供试样品中来自丽水莲都及周边地区的益母草干重明显 大于其他种源地益母草; 来自浙江省内的益母草苗期和花蕾期的水苏碱含量均明显高于来自其他省份 的益母草.干重和水苏碱含量均较高的为来自浙江省内的益母草.为此, 从药材质量和产量效益角度 考虑, 在浙西南地区人工栽培益母草应优先考虑从当地收集种源. 关键词: 益母草; 干重; 水苏碱含量; 种源选择 中图分类号: S-3 文献标志码: A 论文编号: 2011-0414 Determination of Dry Weight and Stachyose Alkali Content of Leonurus Artemisia from Different Sources Jiang Huanian (College of Lishui, Lishui Zhejiang 323000) Abstract: The aim was to study the dry weight and stachyose alkali content of Leonurus Artemisia. This study determined and analyzed the dry weight and stachyose alkali content of Leonurus Artemisia, through collecting Leonurus Artemisia seeds (10 samples from Zhejiang Province and 9 samples from other provinces) and planting these seeds in Lishui, Zhejiang Province. The results showed that: the dry weight and stachyose alkali content of the Leonurus Artemisia samples from Liandu and surrounding areas of Lishui were significantly higher than that of other samples. As a result, the seeds should be collected locally considering the quality and productivity. Key words: Leonurus Artemisia; dry weight; stachyose alkali content; provenance 存于阴凉通风处.种子于 2007 年2月28 日种植在浙 江丽水市莲都区碧湖镇.种植地为砂壤土, 土壤肥力 均匀, 排水良好, 每个实验小区面积为 3 m2 .19 个益 母草种源地如表1所示. 1.2 试验方法 试验材料采用随机取样法, 每个小区取5个点, 每 个点各选取不同种源地益母草5株, 剪除根系, 将地上 部称重, 得鲜重M1, 晾干后在46℃条件下烘至恒重后 称量M2, 取平均值. 水苏碱含量测定: 利用水苏碱母液制作标准曲 线.根据标准曲线求出标准线性方程为:y=-0.0223x+0.5694, 其中 y 为吸光度值, x 为水苏碱含 量(mg/mL) .水苏碱的提取, 采用索氏提取法[7] , 用分 光光度法测定水苏碱含量[8] .幼苗期水苏碱含量采用 全草测定, 花蕾期采用叶片测定[9] .在水苏碱含量测 定时, 先测出其吸光度 (Abs) , 然后通过标准曲线方程 求出水苏碱的含量. 1.3 数据处理与分析 利用 Microsoft Excel2003 和DPS3.01 软件对数据 进行处理分析. 2 结果与分析 2.1 地上部干重的测定结果与比较 由图 1 可以看出, 不同种源地的益母草的花蕾期 地上部分干重存在差异, 来自浙江莲都、 兰溪、 武义 (麻济) 、 平湖的益母草干重明显大于其他种源地益母草, 来自齐齐哈尔、 黑龙江鸡西、 辽宁、 宁夏的最小. 方差分析 (表2) 和多重比较结果显示: 来自浙江 省内以及江西、 甘肃的益母草之间干重差异不显著; 而 前述种源与宁夏隆德、 辽宁沈阳、 黑龙江齐齐哈尔的益 母草干重差异达显著性差异.地上部分干重是产量的 反映, 是评价种源质量的重要性状指标[10] .在种源的 选用中, 要充分考虑干重这个指标. 2.2 不同种源地益母草水苏碱含量测定 由图 2、 图3可以看出, 各种源地益母草水苏碱含 量存在明显的差别, 花蕾期的水苏碱含量均明显高于 幼苗期[11] , 并且幼苗期水苏碱含量高的益母草花蕾期 含量也较高, 幼苗期与花蕾期益母草水苏碱含量变化 趋势是一致的[12] .浙江莲都、 浙江武义 (柳城) 、 浙江兰 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 种源地 浙江宁海 浙江平湖 浙江上虞 浙江诸暨 (店口) 浙江诸暨 (赵家) 浙江义乌 浙江莲都 浙江武义 (麻济) 浙江武义 (柳城) 浙江兰溪 东经 121.42° 121.02° 120.87° 120.23° 120.23° 120.07° 119.92° 119.82° 119.82° 119.48° 北纬 29.52° 30.70° 30.03° 29.72° 29.72° 29.32° 28.45° 28.90° 28.90° 29.12° 序号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 种源地 云南昆明 江西南昌 甘肃陇西 宁夏隆德 河北张家口 辽宁沈阳 吉林长春 黑龙江鸡西 黑龙江齐齐哈尔 东经 102.73° 115.90° 104.62° 106.12° 114.87° 123.38° 125.35° 130.90° 123.97° 北纬 25.05° 28.68° 34.98° 35.63° 40.82° 41.48° 43.88° 45.31° 47.33° 表1 益母草种源地理位置 图1 不同种源地益母草花蕾期地上部分干重比较 · · 192 姜华年: 不同种源地益母草干重和水苏碱含量的测定 溪、 浙江义乌、 浙江武义 (麻济) 的水苏碱含量最高, 来 自吉林长春、 黑龙江齐齐哈尔、 黑龙江鸡西的水苏碱含 量最低.由试验数据可以看出, 来自浙江省内的益母 草的水苏碱含量均明显高于来自其他省份的益母草, 说明益母草具有明显的地域性. 方差分析 (表3、 表4) 和多重比较结果显示: 浙江 莲都的水苏碱含量的平均值最大, 其次浙江武义 (柳城) .浙江莲都除与浙江武义 (柳城) 的水苏碱含量差 异不显著, 与其他种源地均差异极显著; 浙江武义 (柳城) 与浙江兰溪、 浙江义乌差异不显著, 与其他种源地 差异极显著.黑龙江鸡西水苏碱含量的平均值最小, 其次为黑龙江齐齐哈尔和吉林长春. 变异来源 处理间 处理内 总变异 平方和 34.6550 25.0025 59.6575 自由度 18 38 56 均方 1.9253 0.6580 — F值2.926 — — 显著水平 0.0026** — — 表2 不同种源地益母草花蕾期地上部分干重方差分析 图2 不同种源地益母草幼苗期水苏碱含量 图3 不同种源地益母草花蕾期水苏碱含量 变异来源 处理间 处理内 总变异 平方和 21.6446 0.9459 22.5905 自由度 18 38 56 均方 1.2025 0.0249 — F值48.306** — — 显著水平 0.0000** — — 表3 不同种源地益母草幼苗期水苏碱含量方差分析 注: ** 为0.01水平极显著. 注: ** 为0.01水平极显著. · · 193 3 结论与讨论 试验结果表明, 在供试的 19 个样本中, 地上部分 干重和水苏碱含量2指标均较高的是来自浙江本地的 益母草; 而来自黑龙江、 吉林、 辽宁、 宁夏等外地的益母 草水苏碱含量普遍低于浙江当地种.因此, 在浙西南 地区, 人工栽培用种宜优先选用当地种源, 这是一个既 可以获得较高产量, 又能确保一定品质质量的合理选 择. 试验表明, 来自浙江省当地的益母草的水苏碱含 量普遍高于外省品种的含量, 这个研究结果与浙江省 中药研究所徐建中等[13] 研究基本一致; 幼苗期水苏碱 含量与花蕾期含量有相关性, 一般幼苗期含量高的, 到 花蕾期也表现较高, 这个结果与沈晓霞等[14] 的研究结 果一致.幼苗期水苏碱的含量变化和高低是童子益母 草[15] 生产选种的依据.这些实验结果为当地生产用种 源选择提供了依据, 也充实了益母草的基础研究.然而, 试验未对浙江莲都、 武义、 兰溪、 义乌的益母草在浙 江省以外区域的表现进行研究, 也未对干重和水苏碱 含量这 2 指标之间是否具有相关性进行研究, 因此难 以确认前述种源地益母草就是理想种源, 这也是本研 究不足, 有待开展更广泛深入的研究. 已有的研究表明, 益母草分布广泛, 区域适应性 强, 人工选择程度低, 遗传变异性大[16] , 开展益母草种 质中多指标成分的定量测定和指纹图谱等的定性测 定, 这是进行益母草品种定向培育的必然趋势. 参考文献 [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:化学工业 出版社,2005:203-204. 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[16] 余琪,沈晓霞,沈宇峰,等.益母草种质资源遗传多样性的 AFLP 分析[J].中草药,2009.8,40(8):1296. 变异来源 处理间 处理内 总变异 平方和 189.9284 17.6438 207.5722 自由度 18 38 56 均方 10.5516 0.4643 — F值22.725** — — 显著水平 0.0000** — — 表4 不同种源地益母草花蕾期水苏碱含量方差分析 注: ** 为0.01水平极显著. · · 194