第二十二章
第一节 概述
- 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）是20世纪六十年代末在经典液相柱色谱法的基础上引入了气相色谱的理论和技术，采用高压泵、高效固定相以及高灵敏度检测器发展而成的分离分析方法。
第一节
概述- 经典柱色谱法流动相是在常压或低压下运行，传质速度慢，所用固定相颗粒粗，柱效低，分离时间长；色谱柱不能连续使用；样品用量大，灵敏度低；除了用于制备分离外，不 能在线检测。HPLC和GC的基本理论一致，定性定量原理完全一样，均可用计算机控制色谱条件和色谱的处理程序进行在线检测。
第一节
概述- HPLC和GC的不同点为：
- ①流动相不同：GC用气体做流动相，载气种类少，性质接近，改变载气对柱效和分离效率影响小。HPLC以液体做流动相，且液体种类多，性质差别大，可供选择范围广，是控制柱效和分离效率的重要因素之一；
- ②固定相差别：GC多是固体吸附剂或在担体表面上涂渍液体固定相，且粒度粗。HPLC大都是新型的固体吸附剂、化学键合相等，粒度小（一般为3～10μm）；
- ③使用范围更广：GC主要用于挥发性、热稳定性好的物质的分析。因此，GC只能分析占有机物总数15%～20%的物质。HPLC可分析高沸点、难挥发和热不稳定的化合物、离子型化合物和高聚物乃至生物大分子等物质。
第一节
概述- HPLC采用高灵敏度检测器，如紫外检测器的最小检测量可达纳克(10-9g)级、荧光检测器的灵敏度可达10-11g。HPLC的特点：分离效率高、分析速度快、灵敏度高、色谱柱可反复使用、流动相可选择范围宽、流出组分容易收集、操作自动化、适用范围广。
第二节
高效液相色谱仪- 高效液相色谱技术得到迅速发展，基本原理和色谱流程都是相同的，仍然由流动相输送系统、进样系统、色谱分离系统、检测记录数据处理系统组成。
- 溶剂贮器1中的流动相经混合室2混匀，被泵3吸入，然后输出，导入进样器5。被分析样品用注射器6由进样器处注入，并随流动相一起依次通过预柱7、色谱柱8后进入检测器9。检测信号经过数据系统10处理，记录色谱峰面积和色谱图。若是制备色谱，可以使用馏分收集器11。复杂样品采用梯度洗脱（借助于梯度控制器4）使样品各组分均得到最佳分离。整个仪器可由微处理机操纵，包括数据处理和操作控制。