分子生物学检测实验室技术要求与质量控制
国家质检总局动植物检疫实验所二OO四年六月
实验室技术要求
总体要求质量控制质量保证
实验室总体要求
实验室分区要求实验室工作人员要求安全防护废弃物处理结果判断与验证
实验室分区要求—设施和环境要求
各工作区域设置缓冲间,缓冲间的压力为负压(或上设抽风装置),与其相连的工作间为正压,工作间与缓冲间之间宜安装磁性连锁装置.不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室,并有明显的标志,各区间不能直通.各区之间如果是紧密相连,需安装物品传递舱.每个工作区域的顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254 nm,安装数量为每20 m2安装一支40W的紫外灯,灯与地面的距离不宜超过(2.0±0.1)m.
实验室分区要求 —工作区域的设置及要求
核酸检验区 试剂贮存和准备区; 样品制备区; 核酸制备区 扩增区; 扩增产物分析区蛋白质检验区 蛋白质分离纯化区 蛋白质检测区其它区域 设置洗涤消毒室(洗涤、消毒、制备纯水和/或双蒸水、制冰等)、高速/超高速离心机室、低温/超低温冰箱室等.
主要功能:原装试剂和配制试剂的贮存,所有试剂的配制与分装.工作区域的压力要求:未设缓冲间的试剂贮存和准备区,工作区域为正压.注意事项:当试剂经质检合格后,应将其分装贮存备用,贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数决定.用于扩增的试剂应冰冻贮存.
核酸检验区各区功能 — 试剂贮存和准备区
核酸检验区各区功能 — 样品制备区
主要功能:实验室样品的混样和测试样品的制备.工作区域的压力要求:未设缓冲间的样品制备区,工作区域为负压或减压,可安装排风系统.注意事项:此区应远离其它实验操作区;粉碎样品时的器皿应单独使用,所用的器具在使用前应经过彻底清洗并高压消毒,防止交叉污染;称取的测试样品应加盖后再移至样品核酸制备区.
核酸检验区各区功能 — 核酸制备区
主要功能:核酸的提取纯化与贮存;核酸含量的测定;测试样品DNA的保存.工作区域的压力要求:未设缓冲间的核酸制备区,工作区域为负压或减压,可安装排风系统.注意事项:已纯化的核酸应保存于-20℃或-80℃,避免反复冻融;阳性和阴性标准物质DNA可调整至常用的使用浓度后分装并冷冻保存.
核酸检验区各区功能 — 扩增区
主要功能:PCR扩增反应体系的配制和模板的加入,核酸扩增.工作区域的压力要求:未设缓冲间的扩增区,工作区域为负压或减压,可安装排风系统.注意事项:严格限制无关人员出入并减少在本区内走动;加样应在超净工作台(生物安全柜)内进行,超净工作台的气流方向宜选择垂流式;巢式PCR的第二次加样必须在此区进行.
核酸检验区各区功能 — 扩增产物分析区
主要功能:扩增产物的测定工作区域的压力要求:未设缓冲间的扩增产物区,工作区域为负压或减压,应安装排风系统..注意事项:此区是最主要的扩增产物污染来源,应远离其它实验操作区;使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时,应使用洗板机洗板.若实验仅采用全自动扩增检测仪(如实时荧光定量PCR仪),可将扩增区与扩增产物分析区合并为一个区.
蛋白质检验区— 功能及要求
蛋白质分离纯化区主要功能:用于蛋白质的分离与纯化.工作区域要求:蛋白质纯化应具备低温工作的场地,如4℃冷房和/或层析柜等.蛋白质分离纯化区主要功能:蛋白质分析检测
control test
阳性结果
阴性结果
检测工作流程
实验室样品到样验收(确定是否具备检验的基本条件)混样获取测试样品a测试样品的制备(待检状态) 核酸和/或蛋白等目标物质的提取 PCR实验(包括扩增和产物分析)和/或蛋白质检测结果判定结果表述(出具检验报告)
实验室质量控制和质量保证-工作人员操作要求
按照ISO/IEC 17025:1999中5.2的要求.应具备良好的分子生物学专业技术操作规范.方向:试剂贮存和准备区样本制备区核酸制备区扩增区扩增产物分析区
各实验区域应有专用的仪器设备,同一区域内的仪器设备、物品和工作服应有明显标记,避免与其他区域的仪器设备混用.仪器设备的校准应符合ISO/IEC 17025:1999中5.5的规定.
实验室质量控制和质量保证-仪器设备要求
实验室质量控制和质量保证-试剂要求
除另有规定外,所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和DNase的分析纯或生化试剂.试剂的选购、验收、贮存应符合ISO/IEC 17025:1999规定.实验用水应符合GB 6682-92中一级水的规格.去离子水的电阻应达到18.2Ω.商品试剂盒应注明到货日期,对所收到的试剂盒应按规定的贮存条件存放.对菌种、质粒、动植物细胞组织的贮存与保管应符合ASTM E 1342-97的规定.

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