酶免疫测试（EIA）技术
翁 锡
全广州体育学院
酶免疫分析技术（enzyme
immunoassay,EIA）是继荧光免疫技术和放射免疫技术之后建立的一种非放射性免疫技术，是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合，发展建立的一种非放射性标记的免疫性标记分析方法。酶免疫分析系统则属于开放式的，符合标准的各种品牌的ELISA试剂盒均可应用，且有灵敏度高、特异性强、酶免疫试剂的性质比较稳定、操作方法简便、快速、无放射性污染以及应用范围广等很多优点。酶免疫分析技术
非均相酶免疫分析
均相酶免疫分析
非均相液相酶免疫分析
非均相固相酶免疫分析
以聚苯乙烯制品作为载体的酶联免疫吸附实验---ELISA
一、酶免疫测试（EIA）技术分类
二、ELISA技术方法与原理
（1）ELISA特点：在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"；酶标记免疫活性物质，进行信号放大；有二步温育反应二次洗涤过程；灵敏度特异性相对较高。
（2）ELISA局限性：只能检测到ng水平，精密度差（批内CV15-20%）；线性范围窄（一个数量级）。
（3）根据检测目的和操作步骤不同有三种基本方法：双抗体（原）夹心法
；间接法；竞争法ELISA测试原理
1）将链霉亲合素包被的聚苯乙烯塑料试管安置固定。
2）将生物素标记的特异性抗体和待测抗原加入链霉亲合素包被小管内，经温育，生物素和亲和素发生连接，待测抗原和特异性抗体发生结合，形成固相包被亲合素-生物素-特异性抗体-待测抗原复合物，然后进行洗涤，除去未结合的抗原和生物素标记抗体。
3）加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性抗体(酶标抗体)，经温育形成固相包被链酶亲合素-生物素-特异性抗体-待测抗原-酶标抗体复合物，再次进行洗涤，除去多余的酶标抗体。
4）加入底物ABTS和H2O2，经温育，ABTS在辣根过氧化物酶的作用下显色，然后经波长450nm的光度计测定获得A值，从标准曲线上计算出待测抗原的含量。
三、自动化酶标仪基本工作原理
光源 光路 微孔板
触摸屏电源
单