在复杂的混合物中寻找低丰度的酪氨酸 磷酸化蛋白
信号途径中蛋白质的激活由于低丰度在没有进行 样品制备时一般不能用于SDS-PAGE或MS分析检 测. 具有固定的抗pTy抗体的Protein G Mag Sepharose 填料被用于富集和浓缩酪氨酸磷酸化蛋白,并允 许以适合MS分析的体积被洗脱. CHO细胞 (7 × 107)在收获和裂解前用100μM的过钒 酸盐预处理3小时.裂解液,含有蛋白酶和磷酸酶 抑制剂,通过离心被澄清,然后在与固定在Protein G Mag Sepharose上的抗pTy抗体在室温下孵育60
A.NHS Mag Sepharose
亲和填料 样品 样品体积 抗体 25 μl NHS Mag Sepharose 人血浆 6 ml 抗血纤维蛋白酶原小鼠单克隆IgG1
B.Protein A Mag Sepharose
亲和填料 样品 样品体积 抗体 25 μl Protein A Mag Sepharose 人血浆 610 ml 抗血纤维蛋白酶原小鼠单克隆IgG1
交联缓冲液 0.15 M Tris,0.5 M NaCl,pH 8.3 结合缓冲液 Tris盐缓冲液(TBS: 50 mM Tris, 150 mM NaCl, pH 7.5) 洗涤缓冲液 TBS,2 M尿素,pH 2.9 洗脱缓冲液 2 × 50 μl 0.1 M 甘氨酸/ HCl, 2 M 尿素, pH 2.9
结合缓冲液 1.2 M KH2PO4,pH 9(提高小鼠IgG1到Protein A 的亲和力) 洗涤缓冲液 TBS,2 M尿素,pH 2.9 洗脱缓冲液 2 × 50 μl 0.1 M 甘氨酸/ HCl, 2 M 尿素, pH 2.9
泳道 第一次洗脱 第二次洗脱 低分子量标准
泳道 低分子量标准 起始原料(1:8稀释) 穿透(1:8稀释) 第一次洗脱 第二次洗脱
图3.人血浆中血纤维蛋白溶酶原的富集.(A)NHS Mag Sepharose的SDS-PAGE结果.(B)Protein A Mag Sepharose的SDS-PAGE结果. 凝胶用Deep Purple总蛋白染料染色后使用 Ettan DIGE Imager扫描仪扫描.箭头指示血纤维蛋白溶酶原的位置.
Ordering information Product Protein A Mag Sepharose Protein A Mag Sepharose Protein G Mag Sepharose Protein G Mag Sepharose NHS Mag Sepharose NHS Mag Sepharose Quantity 1 × 500 μl 4 × 500 μl 1 × 500 μl 4 × 500 μl 1 × 500 μl 4 × 500 μl Code no. 28-9440-06 28-9513-78 28-9440-08 28-9513-79 28-9440-09 28-9513-80 Related products MagRack 6 TiO2 Mag Sepharose TiO2 Mag Sepharose Protein A/G SpinTrap Buffer Kit NHS HP SpinTrap Buffer Kit Protease Inhibitor Mix Quantity 1 Code no. 28-9489-64
1 × 500 μl 28-9440-10 4 × 500 μl 28-9513-77 1 1 1 ml 28-9135-67 28-9135-69 80-6501-23
Mammalian Protein Extraction Buffer 1 × 500 ml 28-9412-79

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