GE Healthcare Life Sciences
数据文件28-9539-39 数据文件28-9539-39 AA
蛋白质样品制备
Protein A Mag Sepharose Protein G Mag Sepharose NHS Mag Sepharose
Protein A Mag Sepharose,Protein G Mag Sepharose 和NHS Mag Sepharose是设计用于简化免疫沉淀 或pull-down目标蛋白富集的磁珠(图1).固定到 Mag Sepharose磁珠的抗体或其他蛋白用于捕获 目标蛋白,之后利用磁力装置收集磁珠.
通用电气医疗集团生命科学部
Mag Sepharose磁珠的关键优势是: Sepharose磁珠的关键优势是:
可见且稠密,很容易点样和收集结合的目标蛋白 非粘附型磁珠消除了弥散效应和聚合物的形成. 无需去污剂就可以使用 目标蛋白以小或大样品体积被快速捕获(低至微 升,高至毫升) 优化的容量用于目标蛋白的富集/免疫沉淀-只 需要少量的抗体 具有可优化用于电泳和MS分析的灵活的洗脱条 件步骤 每种磁珠均提供两种包装规格:适用于20个样品 的1 × 500 μl悬浮液和适用于80个样品的4 × 500 μl 悬浮液.与用于处理微型离心管中磁珠分离工具 的MagRack 6一起,可平行处理达6个样品.
图1. Protein A Mag Sepharose,Protein G Mag Sepharose 和NHS Mag Sepharose设计用于从澄清的细胞裂解液和 生物体液中实现有效的小规模蛋白富集.
目标蛋白的可靠捕获
Protein A Mag Sepharose和Protein G Mag Sepharose 是具有Protein A和Protein G配体的亲和层析填料 (树脂),两者对单克隆或多克隆抗体都具有高度 亲和力.固定到Mag Sepharose填料的Protein A和 Protein G配体上的抗体被用于捕获目标蛋白. NHS Mag Sepharose被设计用于任何含有自由胺 基的蛋白或其他生物分子的共价交联,且被用于 各种类型的pull-down实验.
GE imagination at work
简单化处理
磁珠形式对小规模实验具有极好的性质.高密度 磁珠通过磁力装置可快速捕获,同时磁珠的能见 度确保稳定地收集所有结合的免疫沉淀/pull-down 应用的目标蛋白.这使得低丰度目标蛋白样品的 浓度从毫升降至微升规模.从25 ml样品开始,有 可能在低至2.5 μl体积中获得富集的产物.填料的 性质总结在表1中. 所有的产品都提供用于下游分析的样品制备的优 化操作步骤,例如MALDI-TOF和LC-MS. MagRack 6能够制备6个样品,收集在1.5 ml微型 离心管中.离心管放置于支架上,磁珠在几秒内 可被吸至磁铁,以轻松地去除上清,而磁珠则留 在离心管内.对于更大体积的样品,当结合目标 蛋白时可使用50 ml塑料试管.在初次捕获目标蛋 白后推荐使用磁性的pickpen把磁珠转移到更小的 离心管.一个可选的方法是通过使用摆式离心机 旋下磁珠. 为方便使用,现有Protein A/G SpinTrap Buffer试剂 盒和NHS SpinTrap Buffer试剂盒可用.这些缓冲液 试剂盒可节省缓冲液配制时间,加快可再生的蛋 白富集.
表1. Protein A Mag Sepharose,Protein G Mag Sepharose和 NHS Mag Sepharose的特性
Protein A Mag Sepharose 基质 配体 结合容量 颗粒大小 工作温度 保存溶液 保存温度 顺磁的,球形的和高度交联的琼脂糖颗粒 天然Protein A 8–17 mg 人IgG/ml胶 37–100 μm 室温 20%乙醇 4℃到8℃
结合容量 颗粒大小 工作温度 保存溶液 保存温度
8–14μml/ml胶 37–100 μm 室温 2-异丙醇 4℃到8℃
灵活的操作步骤
对于Protein A Mag Sepharose和Protein G Mag Sepharose,有两个可供选择的操作步骤用于蛋 白富集:(1)交联的操作步骤,其中目标蛋白被洗 脱,而抗体通过利用交联剂仍共价结合到基质上. (2)经典的操作步骤,其中目标蛋白与抗体一起被 洗脱. NHS Mag Sepharose被预先活化,然后来自不同 物种的蛋白质,抗体和核酸适配子能够通过主要 的氨基被共价交联.在第二步,目标生物分子被 亲和捕获并按共价交联的操作步骤洗脱. 用于蛋白富集的最佳参数取决于样品中的生物分 子的特殊组合.因此对于每个特殊的组合为了获 得最好的结果可能需要缓冲液的优化.产品说明 书列出推荐的缓冲液.

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