细菌的分离培养技术
成大荣
扬州大学兽医学院
在细菌学检验中分离培养是极其重要的环节, 正确的分离培养有助于很快得到可疑的致病菌, 对疫病的诊断与防控是至关重要的.
一.在分离培养时应注意下列事项:
1. 2. 3. 4. 正确的采集病料; 严格无菌操作; 选择适合于所分离细菌的培养基; 满足所要分离菌的培养条件.
1. 正确的采集病料
① 从病料中分离微生物是最常用的方法之一. 为了得到更好的结果,获得适宜的病料则是非常重要
② 采取病料的种类主要决定于疫病的性质. 一般来说:
全身性感染—— 应该采取血液及内脏, 局部感染 —— 则要采取病患部位, 一些特殊病例则要求特殊处理. 例如:
口蹄疫虽然是全身感染,但其含毒最高的组织却是水疱上皮和 水疱液. 这种特殊情况的正确处理与操作者本人的专业知识有很大关系.
不论是采取局部组织或是内脏器官,均应采取含微生物 最多的组织或具有明显病变的组织.
③ 待检材料应该放到灭菌容器中,整个取材过程 要求无菌操作. ④ 采取病料的时间也应特别注意,
如果采取活体病料,应考虑病原在疾病发展过程中部 位的变化,患畜死后应立即采取病料,越早越好.
⑤ 所用器械及物品均应事先灭菌好备用:
金属器具包装后高压灭菌或煮沸30分钟, 玻璃器皿可高压灭菌也可干热灭菌, 胶皮塞等则要高压灭菌.
2. 注意无菌操作
① 无菌操作是对微生物学工作者最根本的要求.不 论在什么情况下,头脑中都应该有这个概念. ② 什么是无菌操作 通俗说法就是在操作过程中,既要避免各种 外界微生物进入操作对象,又要杜绝操作对象 污染周围环境. 要想获得良好的效果,操作方法必须正确, 这要求操作者必须经过长时间的严格训练.
3. 选择适合于所分离细菌的培养基
培养基是指由人工方法配合而成的营养基质, 专供微生物培养,分离,鉴别,研究和保存菌种 用的混合营养物制品.
(1)配制培养基的基本原则
依据细菌的物质代谢要求和营养需要,必须含有 细菌生长繁殖所需要的碳源,氮源,矿物质以及生长 环境条件,因此,在制作细菌培养基时,必须掌握如 下原则和要求:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 含各种营养物质 适当的水分 酸碱度(pH) 不应含有抑制细菌生长的物质 应均质透明应彻底灭菌 对某些微生物必须提供一些特殊物质
(2)常用培养基种类
选择培养基 厌氧培养基
增菌培养基
鉴别培养基
基础培养基
(3)细菌的生长情况
4. 满足所要分离菌的培养条件,
适宜的培养基条件; 适宜的温度条件; 适宜的气体条件.
二.细菌的分离培养与移植的方法
分离培养就是把病料中的病原微生物或者把目的菌 从微生物的混合材料中分离培养出来,并获得分离物 的单一生长材料,以进行诊断及有关研究工作.
1.
待检材料的处理
严格无菌采取的待检材料不经处理可直接接种于
培养基中,进行分离.
对于污染较严重的材料,在接种培养基前,必须 根据污染杂菌的程度及性质讲行适当处理,之后方 可进行分离培养.
①
加热处理法
当怀疑病料中的病原微生物为芽胞菌时,可加入 1:5-1:10倍灭菌生理盐水研磨(液体病料除外),置 75℃水浴加热30min,或80℃经15-20min,以杀死 微生物的繁殖体(包括杂菌及病原菌),而细菌芽 胞仍存活,然后将处理过的待检材料接种到适当的 培养基上,即可获得纯培养.

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