例如,HBsAg,其敏感度可达0.1ng/ml.
1.4 免疫测定在临床检验中的应用
由于各种抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体,利用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原,因此免疫测定的应用范围极广.
2 ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体.在这种测定方法中有三个必要的试剂:
(1)固相的抗原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);
(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);
(3)酶反应的底物.
可设计出各种不同类型的检测方法.
2.2.1 双抗体夹心法测抗原
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP等.只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.
2.2.2 双抗原夹心法测抗体
用特异性抗原进行包被和制备酶结合物.此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法.乙肝标志物中抗HBsAg的检测常采用本法.本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法.
2.2.3 间接法测抗体
传染病的诊断.间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法.
2.2.4 竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体.
2.2.5 竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式.其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合.标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅.小分子激素,药物等ELISA测定多用此法.
2.2.6 捕获包被法测抗体
IgM的检测常用于传染病的诊断.用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM).此法常用于病毒性感染的早期诊断.
2.2.7 ABS-ELISA法
①:固相支持物;
②:样品;
③:特异性IgG;
④:生物素化抗小鼠IgG (Biotin);
⑤:辣根过氧化物酶HRP-酶标链亲和素(Avidin);
⑥:DAB显色液;
⑦:显色;
3. ELISA的试剂(A,B,C三部分)
ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂,结合物和酶的底物.
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品,参考标准品;
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;
(7)酶反应终止液
ELISA的试剂准备A
固相载体 聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性.
聚氯乙烯.聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高.

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