原理
试剂准备
对照
标本
结果
ELISA 知识简介
03/11/15
1. ELISA的原理
2. ELISA的类型
3. 试剂准备:免疫吸附剂
结合物
酶底物的准备
4. 对照设定
5. 标本的采取和保存
6. 结果判断
ELISA是一种免疫测定(immunoassay,IA) .基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析.
1. ELISA的原理
酶免疫测定类型
这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay),简称ELISA.
酶免疫技术
酶免疫组化
酶免疫测定
均相酶免疫测定
非均相酶免疫测定
固相酶免疫测定
液相酶免疫测定
1.1 抗原抗体反应
1.1.1 可逆性
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗体的亲和力(affinity),可以用平衡常数K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab] ,Ag·Ab的解离程度与K值有关.高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离.解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性.
1.1.2 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间.化学结构和空间构型互补关系,具有高度的特异性.

测定某一特定的物质,而不需先分离待检物.
1.1.3 最适比例
1.1.4 敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml
免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿
标记的免疫敏感度可提高数千倍,达ng/ml水平

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