__________ thermal denaturation；Cu-Zn（4号Times New Roman）
_ （正文+宋体+4号） 超氧化物歧化酶(简称SOD)是生物体内防御氧化损伤的一种十分重要的抗氧化酶之一, 作用于超氧阴离子发生歧化反应, 清除体内的超氧阴离子自由基, 对细胞膜起到保护作用
。之前国内外都对SOD 进行了比较全面的研究, 在SOD的化学性质、生物学特性、分子结构及药理等领域都有了详细的研究成果, 且已从植物、动物、微生物等多种生物材料中分离纯化到SOD。有人采用基因工程的手段成功提取了SOD，根据基因工程的特点制备的SOD虽然具有较少的免疫及过敏反应，但是因其生产周期较长因此并不适合大规模的应用
。与此同时，从植物中提取SOD工艺复杂且不易纯化。由于SOD被广泛应用于化妆品业和食品工业。工业上的大量需求，使得对SOD的分离提纯工艺研究成为必要，而如何能够以最低成本及最高活力提取SOD正是目前科学界对于SOD的研究热点。
我国血液资源丰富，但是对禽血如鸭血的利用相对较少，如何能够解决集中屠宰产生的血液造成的污染以及建立一条成熟的禽血加工生产线成为一个重要的课题。基于这带你，作者在如何优化鸭血SOD提取工艺上进行了相关条件的研究。
1_ 材料与方法（小3号+仿宋+加粗）
1.1 材料（小4号黑体）
__ 购于农贸市场幼龄鸭两只成年鸭1只，从颈部剪喉取血约250ml，用事先配制好的萃取剂（具抗凝成分）处理。
试剂：
Tris进口分装； 柠檬酸； 柠檬酸三钠；CuCl2； ZnSO4；NaCl；焦没石子酸；KH2PO4·3H20 ； Folin B 均为国产AR
仪器：
紫外分光光度计型号：北京普析通用仪器有限责任公司；_____
水浴锅型号：SSW微电脑电热恒温水浴锅；Ultraspec 2100 Pro UV/visual Spectrophometer；Mettler Toledo PL2002 分析天平；DEAE-Sepharose-FF层析柱及调料；透析袋；Nanodrop 1000；Eppendorf centrifuge 5418；
Eppendorf centri 5417R；Spx 智能生化培养箱（宁波江南仪器）；Scotsman AF200 制冰机；Electrolux BCD-190K冰箱；
Amersham pharmaciaiotech amersham biosciences RECiii
1.2 SOD酶活力测定方法__
SOD酶活力的定义;
对各部酶液利用紫外分光光度计，以邻苯三酚自氧化法（GBT 5009.171-2003）测定各步蛋白的酶活力：在25°左右，将各步获得的酶液调节到合适的浓度，控制邻苯三酚的量使其在波长为325nm的1min后的吸光值和初始条件下的差值
约为0.070，加入一定浓度的酶液
_ 具体步骤按（1）计算
1.3 蛋白含量的测定
___ 采用Folin酚法测定样液中蛋白质的含量；
部分使用nanodrop1000仪器初步测定蛋白含量，以确定合理的稀释倍数
具体方法见[4]
1.4总体工艺流程
1.4.1 萃取工艺（4号+楷体GB2312）
按照王仲礼
的方法配制萃取剂，萃取剂的量为血量的1/3,由于该萃取剂中含有抗凝血成分，因此无需再加入抗凝剂。再加入约和血液等量的6.5%的NaCl溶液，迅速剧烈振荡，磁力搅拌1h左右，此步非常关键。
1.4.2 热变性最优条件探究
SOD是一种热稳定性相对较好的蛋白质。禽血中主要含有的是Cu-Zn SOD
，因此添加Cu,Zn离子可能在其热变性的过程中具有一定的保护作用。本实验根据前人对猪血、牛血等SOD热变性实验条件的研究，使用了由学韬软件工作室开发的正交设计助手设计了由加热温度，加热时间，溶液PH，三个参数和四个水平组成的正交法，表格见表1。